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ZetaView F-NTA通過單次進(jìn)樣,全面評(píng)估EV質(zhì)量

來源:大昌洋行(上海)有限公司(大昌華嘉科學(xué)儀器部)   2024年09月07日 11:06  



細(xì)胞外囊泡(Extracellular Vesicle, EV)在醫(yī)藥研究中有非常好的應(yīng)用前景。但如果EV保存條件不當(dāng)致使其濃度降低,往往也意味著EV活性降低,生物完整性缺失,最終會(huì)嚴(yán)重影響EV的應(yīng)用。所以,在實(shí)際應(yīng)用過程中,如何穩(wěn)定地保存EV,如何對(duì)已保存的EV進(jìn)行質(zhì)量評(píng)估,也是一項(xiàng)非常重要的工作。


ZetaView是在EV表征中經(jīng)常用到的一種經(jīng)典的NTA技術(shù)手段。它可以通過實(shí)時(shí)追蹤顆粒運(yùn)動(dòng)的方式,檢測(cè)EV的粒徑分布、數(shù)量濃度、zeta電位等信息,還可以借助熒光標(biāo)記的方式,鑒定樣品的純度和生物標(biāo)志物,對(duì)EV樣品進(jìn)行Colocalization分析。因此, ZetaView被廣泛應(yīng)用于EV的表征與鑒定工作中。


今天的文章以某種EV為例,介紹了如何通過ZetaView的熒光檢測(cè)功能(F-NTA),對(duì)所保存的EV樣品進(jìn)行質(zhì)量評(píng)估。該EV樣品來源于HEK293T,能表達(dá)熒光蛋白CD63 dTomato,同時(shí)又通過CD63 APC和CD81 BV421對(duì)其進(jìn)行熒光標(biāo)記。該樣品從-80℃條件解凍后,在25℃下保存0天、3天、6天、10天,再分別通過散射光模式和熒光模式對(duì)樣品進(jìn)行檢測(cè)。


ZetaView檢測(cè)結(jié)果顯示(如圖1),在散射光模式、CD63-APC熒光模式、dTomato熒光模式下檢測(cè)到的EV濃度,隨著保存時(shí)間的延長(zhǎng)而明顯降低,說明隨著保存時(shí)間的延長(zhǎng),EV樣品在不斷降解,導(dǎo)致濃度在不斷降低。這三種測(cè)試模式下得到的結(jié)果是一致的。CD63-APC熒光模式和dTomato熒光模式下,在不同時(shí)間點(diǎn)測(cè)到的EV濃度基本一致,且均低于相同時(shí)間的散射光模式下測(cè)到的EV濃度。兩種熒光模式下得到的數(shù)據(jù)可以相互佐證,也進(jìn)一步證明了以上測(cè)試方法的可靠性。有意思的是,CD81-BV421熒光模式下測(cè)到的EV濃度變化不大,可能與對(duì)應(yīng)的EV亞群在該保存條件下穩(wěn)定性很好有關(guān)。



ZetaView F-NTA通過單次進(jìn)樣,全面評(píng)估EV質(zhì)量


圖1. 通過ZetaView在散射光模式、CD63-APC熒光模式、CD81-BV421熒光模式、dTomato熒光模式下,分別于第0、3、6、10天測(cè)到的EV濃度


另外,如圖2所示,在同一測(cè)試模式中、不同保存時(shí)間下,ZetaView測(cè)到的EV粒徑值比較穩(wěn)定,說明EV濃度降低的原因是降解,而不是聚集。不同測(cè)試模式下,ZetaView測(cè)到的粒徑值有一定的差異,這與所檢測(cè)的EV群體差異有關(guān)。


ZetaView F-NTA通過單次進(jìn)樣,全面評(píng)估EV質(zhì)量


圖2. 通過ZetaView在散射光模式、CD63-APC熒光模式、CD81-BV421熒光模式、dTomato熒光模式下,分別于第0、3、6、10天測(cè)到的EV粒徑


由以上的ZetaView測(cè)試數(shù)據(jù)可以看出,在特定的保存條件下,隨著保存時(shí)間的延長(zhǎng),該EV樣品在不斷地降解。該數(shù)據(jù)從另一方面也證實(shí)了ZetaView熒光檢測(cè)方法(F-NTA)用于EV質(zhì)量的快速評(píng)估的可行性。


盡管以上實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)繁多,但在ZetaView上,單次進(jìn)樣即可完成以上所有數(shù)據(jù)的測(cè)試,實(shí)際上,實(shí)驗(yàn)人員還可以進(jìn)一步對(duì)該EV樣品進(jìn)行多熒光標(biāo)記的Colocalization檢測(cè)和zeta電位檢測(cè)。這也使得ZetaView的強(qiáng)大功能在EV表征與鑒定工作中得到更多的體現(xiàn)。


ZetaView F-NTA通過單次進(jìn)樣,全面評(píng)估EV質(zhì)量






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