酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)技術(shù) (Enzyme Linked Immunospot Assay, ELISPOT) 是細(xì)胞免疫學(xué)研究中的檢測(cè)方法之一,廣泛應(yīng)用于測(cè)定分泌特異性抗體或細(xì)胞因子的單個(gè)細(xì)胞對(duì)特異性抗原免疫應(yīng)答能力的細(xì)胞免疫學(xué)技術(shù)。
由于是單細(xì)胞水平檢測(cè),ELISPOT 比 ELISA 和有限稀釋法等具有更高的靈敏性。ELISPOT 技術(shù)可精確測(cè)量分泌細(xì)胞的比例,達(dá)到 1/1000000 細(xì)胞的靈敏度,比傳統(tǒng)方法高2個(gè)數(shù)量級(jí)。與基于流式細(xì)胞術(shù)的細(xì)胞內(nèi)染色法 (Intracellular Cytokine Staining, ICS) 相比較,ELISPOT 技術(shù)不僅可在分泌細(xì)胞周圍持續(xù)捕獲細(xì)胞因子。同時(shí),在檢測(cè)細(xì)胞因子的分泌時(shí),不需要添加分泌抑制劑處理細(xì)胞。
ELISPOT 實(shí)驗(yàn)原理
免疫細(xì)胞在刺激物存在的條件下被激活,其分泌的細(xì)胞因子/免疫球蛋白被 ELISPOT 板底 PVDF 膜上 (預(yù)包板) 的特異性單抗捕獲,去除細(xì)胞后,被捕獲的細(xì)胞因子與生物素標(biāo)記的單抗結(jié)合,其后二者再與堿性磷酸酶或辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素結(jié)合,加入底物顯色后,PVDF 膜上有反應(yīng)作用的細(xì)胞會(huì)留下直徑大小不等的染色斑點(diǎn),通過酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)分析儀 (ELISPOT Reader) 對(duì)斑點(diǎn)進(jìn)行自動(dòng)計(jì)數(shù)和分析 (圖1)。
基于熒光檢測(cè) ELISPOT 的方法 (FluoroSpot):同樣采用夾心法原理,96孔板的 PVDF 膜上同時(shí)包被多種不同因子的捕獲抗體,細(xì)胞經(jīng)過刺激培養(yǎng)后,分泌的細(xì)胞因子被板底的捕獲抗體所捕獲,再同時(shí)加入兩個(gè)檢測(cè)抗體,其中一種檢測(cè)抗體帶上 Tag 標(biāo)簽,另一種檢測(cè)抗體帶 Biotin 標(biāo)簽,最后加入 anti-tag 和 Streptavidin 標(biāo)記的熒光素進(jìn)行標(biāo)記。儀器中含有濾光片,可以精確的檢測(cè)到目標(biāo)熒光,而遮蔽掉其它顏色熒光,并且保證熒光之間可以互不干擾。生成熒光斑點(diǎn)通過 FluoroSpot 讀板儀進(jìn)行斑點(diǎn)計(jì)數(shù)和數(shù)據(jù)分析。
酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)技術(shù) (Enzyme Linked Immunospot Assay, ELISPOT) 集高靈敏度、高通量、單細(xì)胞水平、多重功能性檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn)于一身,被廣泛應(yīng)用于疫苗免疫原性的效價(jià)評(píng)估、細(xì)胞治療的效價(jià)評(píng)估、基因治療的毒性評(píng)估、傳染性疾病/自身免疫性疾病的診斷和療效評(píng)估以及腫瘤治療的療效評(píng)估、移植免疫排斥的研究以及基礎(chǔ)免疫學(xué)等的研究中。
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源:化工儀器網(wǎng)”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品,未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的,應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用,并注明“來源:化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者,本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源(非化工儀器網(wǎng))的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對(duì)其真實(shí)性負(fù)責(zé),不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí),必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源,并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題,請(qǐng)?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。