細(xì)胞類型和狀態(tài)：轉(zhuǎn)染試劑對(duì)不同細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率不盡相同；轉(zhuǎn)染前細(xì)胞狀態(tài)對(duì)轉(zhuǎn)染效率影響較大，此外，細(xì)胞密度也會(huì)影響轉(zhuǎn)染效率。

轉(zhuǎn)染試劑使用量：轉(zhuǎn)染試劑用量過(guò)多或過(guò)少都可能影響轉(zhuǎn)染效果，可根據(jù)說(shuō)明書(shū)推薦的使用量進(jìn)一步梯度摸索，確定目標(biāo)細(xì)胞的最佳轉(zhuǎn)染條件。

核酸質(zhì)量：使用的DNA或RNA質(zhì)量不佳（如降解或污染）會(huì)影響轉(zhuǎn)染效率。

轉(zhuǎn)染操作：例如制備轉(zhuǎn)染復(fù)合物時(shí)孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)、轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞孵育時(shí)間不夠等都可能導(dǎo)致效率下降。

細(xì)胞狀態(tài)：細(xì)胞電轉(zhuǎn)前，保證細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好，排除細(xì)胞污染情況。

細(xì)胞密度：確保電轉(zhuǎn)細(xì)胞的密度適中，細(xì)胞密度過(guò)高或過(guò)低都可能影響轉(zhuǎn)染效果和細(xì)胞存活率。

電轉(zhuǎn)參數(shù)：優(yōu)化電壓、脈沖時(shí)間和脈沖次數(shù)，針對(duì)目標(biāo)細(xì)胞，確定最佳的電轉(zhuǎn)參數(shù)。

電轉(zhuǎn)緩沖液：使用合適的電轉(zhuǎn)緩沖液，確保能夠有效導(dǎo)電，同時(shí)減少細(xì)胞損傷。

加藥時(shí)間：細(xì)胞在轉(zhuǎn)染帶抗性基因的質(zhì)粒后，需要24-48 h表達(dá)抗性基因，避免過(guò)早加入藥物進(jìn)行篩選，一般建議轉(zhuǎn)染48 h后再加藥，具體時(shí)間可以預(yù)實(shí)驗(yàn)摸索下。

加藥濃度：若藥物濃度設(shè)置過(guò)高，超過(guò)了抗性基因能夠應(yīng)對(duì)的范圍，導(dǎo)致即使轉(zhuǎn)染了抗性基因，細(xì)胞也無(wú)法存活。

抗性基因：抗性基因選擇錯(cuò)誤或轉(zhuǎn)染過(guò)程中抗性基因發(fā)生突變或丟失，都會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞抗性功能喪失。