摘要本研究展示了一種比較品牌和仿制非處方 (OTC) 對(duì)乙酰氨基酚藥物中相關(guān)雜質(zhì)的方法。該工作流程包括 Agilent InfinityLab 液相色譜/質(zhì)譜選擇性檢測(cè)器 (LC/MSD iQ) 和Agilent 1290 Infinity II 液相色譜系統(tǒng)。本研究鑒定的雜質(zhì)濃度低于使用 UV 能夠可靠檢出的濃度。

前言多數(shù) OTC 藥物都是根據(jù)品牌產(chǎn)品開(kāi)發(fā)的仿制藥，無(wú)需處方即可購(gòu)買。這些仿制藥由不同的制造商出售，有助于刺激競(jìng)爭(zhēng)并降低價(jià)格，使患者更容易負(fù)擔(dān)。仿制OTC 藥品生產(chǎn)企業(yè)必須滿足與 USFDA 針對(duì)已批準(zhǔn)品牌藥確定的規(guī)格、純度、穩(wěn)定性和相關(guān)雜質(zhì)限度等相同的質(zhì)量屬性[1]。仿制藥品制造商必須能夠表征其產(chǎn)品及其雜質(zhì)，通常使用 HPLC 和 UV 檢測(cè)。添加質(zhì)量選擇檢測(cè)器可以大大縮短典型 USP或 EP 方法的分析時(shí)間[2]，因?yàn)楣蚕疵摻M分可以由目標(biāo)化合物的質(zhì)量明確地確定。本研究對(duì)比了對(duì)乙酰氨基酚品牌藥和仿制OTC 藥中的相關(guān)雜質(zhì)。使用 InfinityLabLC/MSD iQ 和 1290 Infinity II 液相色譜系統(tǒng)篩查雜質(zhì)。基于單四極桿技術(shù)的LC/MSD iQ 是一款強(qiáng)大耐用的檢測(cè)系統(tǒng)，其設(shè)計(jì)重點(diǎn)是簡(jiǎn)單易用性和可靠性。這是一款直觀的儀器，只需極少的用戶培訓(xùn)。它可以采用高液相色譜流速，并能自動(dòng)優(yōu)化 MS 參數(shù)，以提供最佳結(jié)果。使用質(zhì)譜檢測(cè)能夠確保對(duì)活性藥物成分(API) 及其相關(guān)雜質(zhì)，以及更為重要的任何未知或意外雜質(zhì)進(jìn)行明確檢測(cè)。色譜工作人員可以輕松地將 LC/MSD iQ 作為新模塊加入現(xiàn)有液相色譜堆棧中。此款儀器經(jīng)過(guò)專門設(shè)計(jì)，可以輕松集成到Agilent 1260 Infinity II 液相色譜系統(tǒng)、1290 Infinity II 液相色譜系統(tǒng)甚至更舊型號(hào)的液相色譜系統(tǒng)中，其空間設(shè)計(jì)可插入與液相色譜模塊相同的電源插座中。包括 MS 和真空泵在內(nèi)的 HPLC 堆棧可置于Agilent InfinityLab Flex Bench MS 移動(dòng)支架上，從而節(jié)省了工作臺(tái)空間，并可快速安全地移動(dòng)整個(gè)系統(tǒng)。

實(shí)驗(yàn)部分標(biāo)準(zhǔn)品與化學(xué)品所有試劑和溶劑均為 HPLC 或 LC/MS級(jí)。甲醇購(gòu)自 Honeywell (Morristown,NJ, USA)。對(duì)乙酰氨基酚 API 其相關(guān)雜質(zhì)和乙酸的標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)自 Millipore-Sigma(Merck, Darmstadt, Germany)。超純水產(chǎn)自采用 LC-Pak Polisher 和 0.22 µm 膜式終端過(guò)濾器濾芯的 Milli-Q Integral 系統(tǒng)(EMD Millipore, Billerica, MA, USA)。OTC 藥品樣品購(gòu)自當(dāng)?shù)厮幍?，品牌產(chǎn)品為藥品 1，仿制產(chǎn)品為藥品 2。

儀器LC/MSD iQ 系統(tǒng)包括以下模塊：• Agilent 1290 Infinity II 高速泵(G7120A)• Agilent 1290 Infinity II 樣品瓶進(jìn)樣器(G7129B)• Agilent 1290 Infinity II 高容量柱溫箱(G7116B)• Agilent 1290 Infinity II 二極管陣列檢測(cè)器 (G7117B)• Agilent LC/MSD iQ (G6160AA)將 DAD 與 60 mm 安捷倫最大光強(qiáng)卡套式流通池 (G4212-60007) 配套使用，以使LC/MSD iQ 的 UV 檢測(cè)獲得最大靈敏度。 

樣品前處理將選定藥物雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品稱量至 15 mLFalcon 管中，用甲醇稀釋至 1 mg/mL 的工作濃度，然后超聲處理約 15 分鐘。將100 µL 每種標(biāo)準(zhǔn)品加入 2 mL 螺口樣品瓶中，并用 80:20 甲醇/水稀釋至 1 mL。用 80:20 甲醇/水進(jìn)行連續(xù)稀釋，以制備以下外部校準(zhǔn)曲線的濃度：10、5、2.5、1、0.5 和 0.1 µg/mL。OTC 藥物樣品為片劑，每片對(duì)乙酰氨基酚 (API) 劑量為 500 mg。使用甲醇對(duì) API 及其雜質(zhì)進(jìn)行簡(jiǎn)單的液相萃取。將藥物片劑置于包含 10 mL 甲醇的 15 mL Falcon 管中，振蕩 30 分鐘，超聲處理約 30 分鐘，然后以 4500 rpm 的轉(zhuǎn)速在離心機(jī)中離心約 15 分鐘。然后，從 Falcon 管中吸取1 mL 最終溶液到 2 mL 螺口樣品瓶中進(jìn)行分析，最終 API 濃度為 50 mg/mL。

Agilent OpenLab CDS使用 Agilent OpenLab CDS 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)采集、處理和報(bào)告。OpenLab CDS 提供法規(guī)認(rèn)證功能，可根據(jù)美國(guó) FDA 21 CFRPart 11、歐盟附錄 11 及其他類似法規(guī)提供數(shù)據(jù)可靠性支持。1290 Infinity II LC 和LC/MSD iQ 旨在確保 GxP 實(shí)驗(yàn)室常規(guī)應(yīng)用中可靠且穩(wěn)定的 LC/MS 分析。

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結(jié)論Agilent LC/MSD iQ 可以輕松檢出 OTC 藥品中存在的低至皮克級(jí)柱上量 (ng/mL)的雜質(zhì)。分析品牌和仿制 OTC 藥中的雜質(zhì)，并進(jìn)行對(duì)比。該品牌藥含有四種可檢出雜質(zhì)：4-氨基苯酚、RC-A、RC-B 和 RC-D，而仿制藥含三種可檢出雜質(zhì)：4-氨基苯酚、RC-A 和 RC-B。即使對(duì)品牌藥的分析顯示存在更多檢出雜質(zhì)，但仿制藥中這些雜質(zhì)的濃度更高。兩種 OTC 產(chǎn)品均按照 USFDA 指南[3] 生產(chǎn)，且雜質(zhì)濃度遠(yuǎn)低于指南中規(guī)定的濃度：15 µg/mL 或 0.03% API。在這些濃度下（參見(jiàn)表 4），UV 檢測(cè)器無(wú)法可靠地定量這些雜質(zhì)。此外，在兩種 API 之間觀察到的雜質(zhì)譜差異可以歸因于原材料來(lái)源以及制造過(guò)程中使用的合成和純化工藝差異。