胎牛血清中去除沉淀的方法及凍存和融化注意事項(xiàng)！

百歐博偉生物：不同于其它常用的實(shí)驗(yàn)方法，細(xì)胞培養(yǎng)是一個(gè)動(dòng)態(tài)的過(guò)程。胎牛血清作為細(xì)胞培養(yǎng)一個(gè)極為重要的營(yíng)養(yǎng)來(lái)源，所以血清的種類和品質(zhì)對(duì)于細(xì)胞的生長(zhǎng)產(chǎn)生極大的影響。作為胎牛血清的主要供應(yīng)商之一，我們經(jīng)常收到焦急的客戶來(lái)電，稱血清出現(xiàn)了什么問(wèn)題。小編將針對(duì)血清如何儲(chǔ)存、融化、為何出現(xiàn)沉淀以及如何減少沉淀做出詳細(xì)說(shuō)明，旨在幫助客戶解決血清出現(xiàn)的問(wèn)題。

一、血清沉淀

1、血清非人工產(chǎn)品，沉淀出來(lái)系自然現(xiàn)象

纖維蛋白原(主要)

鹽析出。如磷酸鈣等

膽固醇和脂肪酸

蛋白析出

2、沉淀在下列情況下還會(huì)增加

血清熱滅活

37℃培養(yǎng)(常常由此引發(fā)歧異)

反復(fù)凍融

溶解過(guò)程中沒(méi)有搖勻

伽馬射線照射

長(zhǎng)期存放在2-8°C

血清加入到 RPMI1640 中時(shí)，沉淀往往會(huì)發(fā)生或增加

pH升高時(shí)，沉淀會(huì)增加

在培養(yǎng)板或培養(yǎng)皿中，因?yàn)榕囵B(yǎng)基的蒸發(fā)也會(huì)導(dǎo)致沉淀的增加

3、沉淀不會(huì)影響其對(duì)細(xì)胞的促生長(zhǎng)作用

技術(shù)人員對(duì)此問(wèn)題有過(guò)深入研究證明

請(qǐng)注意一個(gè)例外：沉淀影響巨噬細(xì)胞的培養(yǎng)

4、這種現(xiàn)象發(fā)生在所有的血清中

ln*品牌的網(wǎng)站上說(shuō)“G”品牌的胎牛血清沒(méi)有預(yù)老化，如果存放在2-8℃，血清中的各種蛋白或酯類有可能會(huì)凝聚析出，出現(xiàn)沉淀或混濁。這種不會(huì)影響血清對(duì)細(xì)胞的促生長(zhǎng)作用。我們建議把血清存放在-20℃，并避免反復(fù)凍融。

S*品牌胎牛血清說(shuō)明書中說(shuō):“在熔化過(guò)程中混濁多絮狀沉淀，這種現(xiàn)象對(duì)多數(shù)血清來(lái)說(shuō)是正常的，并不影響其使用質(zhì)量。但它影響血清的外觀，影響瓶與瓶之間的一致性。

5、血清并沒(méi)有被污染

檢測(cè)血清是否被污染方法是將血清接種到血酯板上，培養(yǎng)后看是否有菌落形成.

在1000x顯微鏡下，有經(jīng)驗(yàn)的微生物學(xué)家通過(guò)觀察有無(wú)格蘭仕染色的細(xì)菌，也可以判斷血清是否被污染

二、如何去除血清中的沉淀？

1、如想去除這些絮狀沉淀物，可將血清分裝到無(wú)菌離心管中，以400g離心，上清液即可直接加入到培養(yǎng)液中。

2、不要以過(guò)濾的方式去除這些絮狀沉淀物，因?yàn)榭赡茏枞麨V膜。

三、血清溶解建議-如何減少沉淀

1、將血清從冷凍箱取出后，先置于2-8℃冰箱12-24小時(shí)左右使之浴解，然后在室溫下使之全溶。但必須注意的是，溶解過(guò)程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。

2、切勿將剛剛從-20℃冰箱里拿出來(lái)的血清直接放在水浴中，無(wú)論室溫的水或者37℃的水，因?yàn)樵谒≈醒逖杆偃刍艽蟮臏夭?-20℃到37℃，溫差為57℃)極其容易造成血清產(chǎn)生沉淀。

3、直接放65℃水浴中更是極其殘忍的做法，是對(duì)血清的褻玩，對(duì)科學(xué)規(guī)則的粗暴踐踏。

4、血清應(yīng)該在-10℃以下保存。若一次無(wú)法用完一瓶，應(yīng)該無(wú)菌分裝，再冷凍保存。

四、胎牛血清凍存的注意事項(xiàng)

1、需要長(zhǎng)期保存的血清有必要儲(chǔ)存于-20℃-70℃低溫冰箱中。4℃冰箱中保存時(shí)刻切勿超過(guò)1個(gè)月。由于血清結(jié)冰時(shí)體積會(huì)增加約10%，因而，血清在凍入低溫冰箱前，有必要預(yù)留一定體積空間，不然易發(fā)生污染或玻璃瓶?jī)隽选?/span>

2、合規(guī)生產(chǎn)企業(yè)供給的血清為無(wú)菌，無(wú)需再過(guò)濾除菌。如發(fā)現(xiàn)血清有懸浮物，則可將血清加入培養(yǎng)液內(nèi)一起過(guò)濾，切勿直接過(guò)濾器過(guò)濾血清。

3、瓶裝血清凍結(jié)需采用逐漸凍結(jié)法：-20℃至-70℃低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天。然后移入室溫，待全部溶解后再分裝，在溶解過(guò)程中需不斷悄悄搖晃均勻(小心勿形成氣泡)，使溫度與成分均一，削減沉積的發(fā)作。切勿直接將血清從-20℃進(jìn)入37℃融化，溫差大的情況下血清容易形成蛋白質(zhì)凝聚而出現(xiàn)沉積和沉淀絮狀物。

4、熱滅活是指56℃，30分鐘加熱已凍結(jié)的血清。加熱過(guò)程中須規(guī)矩?fù)u晃均勻。目的是使血清中的補(bǔ)體成分(complement)滅活，除非有必要，一般不建議做此熱處理，因?yàn)闊崽幚頃?huì)形成血清沉積增多，而且還會(huì)影響血清的質(zhì)量。補(bǔ)體參與反應(yīng)有：滑潤(rùn)肌細(xì)胞收縮、肥大細(xì)胞和血小板釋放組胺、增強(qiáng)吞噬作用、促進(jìn)淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞發(fā)作化學(xué)趨化和活化。相關(guān)研究的使用者可以考慮血清增加熱滅活處理。

5、切勿將血清在37℃放置太久或者反復(fù)凍融，不然血清會(huì)變得污濁，同時(shí)血清中的有效成分會(huì)破壞而影響血清質(zhì)量。

6、血清融化后的沉淀主要是血清中的脂蛋白變性及凍結(jié)后血清中纖維蛋白形成，這些絮狀物不會(huì)影響血清本身的質(zhì)量。可分裝至無(wú)菌離心管400g離心去除，也可不用處理直接加入培養(yǎng)基內(nèi)一起培養(yǎng)。不建議您以過(guò)濾的方法去除這些絮狀沉淀物，因?yàn)樗赡軙?huì)阻塞您的過(guò)濾膜。

7、顯微鏡下小黑點(diǎn)是由于經(jīng)過(guò)熱處理過(guò)的血清，沉淀物的形成會(huì)顯著增多，有些沉淀物在顯微鏡呈現(xiàn)為黑點(diǎn)，常誤認(rèn)為血清受污染。

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