大鼠白介素ELISA試劑盒操作注意事項(xiàng)
個(gè)人防護(hù)
手套和防護(hù):試劑盒中的終止液是酸性的,操作時(shí)請(qǐng)記得戴手套,避免接觸皮膚和眼睛。如果不小心接觸到,立即用大量清水沖洗。
試劑保存
溫度控制:試劑盒要放在2~8℃的冰箱里保存,并在有效期內(nèi)使用。
標(biāo)準(zhǔn)品保存:用不完的標(biāo)準(zhǔn)品,要么丟掉,要么分裝后放在-20~-80℃的冰箱里。
試劑回溫
室溫恢復(fù):使用前,讓試劑在室溫下恢復(fù)30分鐘,并確保所有成分和樣品都充分混勻。
避免污染
一次性用品:實(shí)驗(yàn)中使用一次性EP管、槍頭、封板膜和干凈的塑料容器,以避免交叉污染。
操作一致性
標(biāo)準(zhǔn)操作:實(shí)驗(yàn)中,對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品和樣本進(jìn)行復(fù)孔檢測(cè),并保持試劑加入順序一致。每次檢測(cè)都需要做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
洗滌清楚
全部清洗:洗板時(shí)去除殘留液體,以獲得最佳結(jié)果。洗完后立即進(jìn)行下一步,不要讓微孔板干掉。
避免氣泡
輕柔混勻:在重溶或混勻標(biāo)準(zhǔn)品時(shí),要輕柔操作,避免產(chǎn)生氣泡。
顯色和終止
顯色底物:顯色底物添加前應(yīng)無(wú)色,并避光保存。
終止液順序:終止液的添加順序應(yīng)與顯色底物相同。添加后,底物顏色應(yīng)從藍(lán)變黃。
樣本處理
去除沉淀:去除樣本中可見(jiàn)的沉淀,避免使用溶血或高血脂樣本,以免影響結(jié)果。
樣本稀釋
稀釋檢測(cè):如果樣本中靶標(biāo)物濃度過(guò)高,需要適當(dāng)稀釋后再檢測(cè)。正式實(shí)驗(yàn)前,先做預(yù)實(shí)驗(yàn)確定稀釋倍數(shù)。
樣本稀釋小貼士
為什么要稀釋樣本?
如果樣本中目標(biāo)物質(zhì)的濃度太高,超過(guò)了測(cè)試范圍,就需要稀釋,以便準(zhǔn)確測(cè)量。
稀釋到什么程度?
稀釋后,樣本信號(hào)應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線中間范圍內(nèi),以確保數(shù)據(jù)準(zhǔn)確。
稀釋的小技巧
大倍數(shù)稀釋時(shí),建議分步進(jìn)行,比如先稀釋10倍,再?gòu)倪@個(gè)基礎(chǔ)上稀釋20倍,得到準(zhǔn)確的200倍稀釋液。
取多少樣本?
取樣時(shí),至少5微升,以減少操作誤差。
預(yù)實(shí)驗(yàn)很重要
正式實(shí)驗(yàn)前,先做小實(shí)驗(yàn),確定樣本需要稀釋的倍數(shù)。
稀釋操作要規(guī)范
特別是大倍數(shù)稀釋時(shí),要規(guī)范操作,減少誤差。
稀釋后的樣本怎么保存?
稀釋后的樣本要妥善保存,避免反復(fù)凍融,防止蛋白質(zhì)降解。建議分裝后放在-20℃或-70℃的冰箱里。
樣本預(yù)處理
不同類型的樣本需要不同的預(yù)處理方法,合適的預(yù)處理是確保實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確的關(guān)鍵。
稀釋液的選擇
稀釋樣本時(shí),最好用和標(biāo)準(zhǔn)品一樣的稀釋液,以保持實(shí)驗(yàn)條件一致。
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