多光子激光掃描顯微鏡（Multiphoton Laser Scanning Microscopy，簡(jiǎn)稱MPLSM）是一種先進(jìn)的光學(xué)顯微技術(shù)，它利用兩個(gè)或多個(gè)光子同時(shí)吸收的非線性光學(xué)過(guò)程來(lái)激發(fā)熒光，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)生物組織深層結(jié)構(gòu)的高分辨率成像。這種顯微鏡技術(shù)在生物醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用，特別是在活體成像方面，它能夠提供比傳統(tǒng)光學(xué)顯微鏡更深的穿透力和更高的空間分辨率。

1.多光子吸收原理

多光子吸收是一種非線性光學(xué)現(xiàn)象，當(dāng)光子的能量不足以單獨(dú)激發(fā)熒光分子時(shí)，兩個(gè)或多個(gè)光子可以同時(shí)作用于熒光分子，其總能量相當(dāng)于單個(gè)光子能量的兩倍或更多。這種現(xiàn)象只有在光的強(qiáng)度非常高時(shí)才會(huì)發(fā)生，通常在激光聚焦點(diǎn)處實(shí)現(xiàn)。由于多光子吸收僅在高光強(qiáng)的焦點(diǎn)處發(fā)生，因此它具有天然的三維空間選擇性。

多光子激光掃描顯微鏡的工作原理

多光子激光掃描顯微鏡主要由以下幾個(gè)部分組成：激光器、掃描裝置、探測(cè)器和成像處理系統(tǒng)。激光器產(chǎn)生高強(qiáng)度的脈沖激光，通過(guò)掃描裝置（如振鏡或光柵）控制激光束在樣本上的掃描路徑。當(dāng)激光聚焦到樣本上時(shí)，只有在焦點(diǎn)處的熒光分子才會(huì)發(fā)生多光子吸收并發(fā)出熒光。探測(cè)器收集這些熒光信號(hào)，并通過(guò)成像處理系統(tǒng)生成高分辨率的圖像。

2.多光子激光掃描顯微鏡的優(yōu)勢(shì)

深層組織成像能力：由于多光子吸收僅在激光焦點(diǎn)處發(fā)生，因此可以減少樣本表面的光損傷和光毒性，允許對(duì)活體組織進(jìn)行深層成像。

高分辨率：多光子顯微鏡具有較高的空間分辨率，能夠清晰地分辨出生物組織中的細(xì)微結(jié)構(gòu)。

減少光散射：多光子顯微鏡使用的是近紅外光，這種光波長(zhǎng)較長(zhǎng)，散射效應(yīng)較弱，因此能夠?qū)崿F(xiàn)更深層的成像。

活體成像：由于其低光毒性，多光子顯微鏡非常適合長(zhǎng)時(shí)間的活體成像，可以觀察生物體內(nèi)的動(dòng)態(tài)過(guò)程。

3.應(yīng)用領(lǐng)域

多光子激光掃描顯微鏡在生物醫(yī)學(xué)研究中有著廣泛的應(yīng)用，包括但不限于：

神經(jīng)科學(xué)：用于觀察活體大腦中的神經(jīng)元活動(dòng)和神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)。

腫瘤學(xué)：研究腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移過(guò)程。

發(fā)育生物學(xué)：觀察胚胎發(fā)育過(guò)程中的細(xì)胞行為和組織形態(tài)變化。

免疫學(xué)：研究免疫細(xì)胞在組織中的動(dòng)態(tài)行為。

4.結(jié)論

多光子激光掃描顯微鏡是一種強(qiáng)大的成像工具，它通過(guò)多光子吸收原理，實(shí)現(xiàn)了對(duì)生物組織深層結(jié)構(gòu)的高分辨率成像。這種技術(shù)在生物醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域具有不可替代的作用，特別是在活體成像方面，為科學(xué)家們提供了觀察和研究生物體內(nèi)復(fù)雜過(guò)程的新視角。隨著技術(shù)的不斷進(jìn)步，多光子顯微鏡將在未來(lái)的生物醫(yī)學(xué)研究中發(fā)揮更加重要的作用。