介紹

PI（Propidium iodide），即碘化丙啶，是一種常用的熒光染料，在細(xì)胞生物學(xué)研究中發(fā)揮著重要作用。它不能透過完整的細(xì)胞膜，但在細(xì)胞凋亡晚期或細(xì)胞膜受損時，能夠進(jìn)入細(xì)胞并與核酸結(jié)合，發(fā)出紅色熒光。PI常用于細(xì)胞活力檢測、細(xì)胞周期分析以及細(xì)胞凋亡研究等領(lǐng)域。

圖1 PI的化學(xué)結(jié)構(gòu)式

技術(shù)原理原理

PI不能穿透細(xì)胞膜而被排斥在活細(xì)胞外，但是可以穿過破損的細(xì)胞膜而對核染色。利用這一特性，通常與Calcein-AM、Hoechst 33258或 Hoechst 33342等活細(xì)胞熒光探針一起使用，同時對活細(xì)胞和死細(xì)胞染色和鑒定，用于細(xì)胞凋亡相關(guān)的研究。也可以用作多重?zé)晒馊旧膹?fù)染劑，兼容于各種細(xì)胞標(biāo)記技術(shù)，包括直接或者間接的熒光抗體檢測，mRNA原位雜交，細(xì)胞結(jié)構(gòu)特異性的熒光探針檢測法以及組織染色。PI的單獨(dú)染色也可以進(jìn)行細(xì)胞周期的檢測。

使用方法

1、收集細(xì)胞，密度約 2×105~1×106。離心后吸除上清，輕彈管壁就剩下的液體重懸細(xì)胞。加入1 mL常溫存放的PBS；

2、將所有的重懸細(xì)胞轉(zhuǎn)移到4 mL于-20oC預(yù)冷的無水乙醇，在高速渦旋混勻的同時一邊用槍緩慢的添加細(xì)胞懸液到乙醇內(nèi)。于-20oC乙醇中固定5 - 15 min。

3、離心收集細(xì)胞，除去乙醇。輕彈管壁以彈松細(xì)胞后，加入5 mL室溫的PBS。允許細(xì)胞水化15 min；

4、用染色液（100 mM Tris, pH 7.4、150 mM NaCl、1 mM CaCl2、0.5 mM MgCl2 , 0.1% Nonidet® P-40）稀釋1 mg/mL（1.5 mM）PI儲存液1:500，得到3 µM的PI工作液。1 mL 的PI染色液足夠用于每個細(xì)胞樣本的檢測。

5、 樣本制備步后離心收集細(xì)胞，去除上清，用手輕彈管壁以彈松細(xì)胞后，加入1 mL的PI染色工作液。室溫孵育15 min后，流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞分析。

運(yùn)輸與保存方法

冰袋（wet ice）運(yùn)輸。4 oC避光保存，至少一年穩(wěn)定。

常見問題

1）碘化丙啶（PI）是已知的誘變劑，因此PI溶液在丟棄之前需要先經(jīng)過活性炭處理。

2）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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