產(chǎn)品介紹

阿爾瑪藍(lán)（Alamar Blue）是一種氧化還原指示劑，能根據(jù)代謝活性產(chǎn)生吸亮度變化和熒光信號(hào)。這是一種安全無(wú)毒的染料，可用于細(xì)胞活性和細(xì)胞增殖的定量分析以及細(xì)胞因子生物測(cè)定和體外細(xì)胞毒性研究，能有效測(cè)定動(dòng)物、真菌和細(xì)菌細(xì)胞的天然代謝活性。

技術(shù)原理

Alamar Blue在氧化狀態(tài)下呈現(xiàn)紫藍(lán)色無(wú)熒光性，而在還原狀態(tài)下，轉(zhuǎn)變?yōu)槌史奂t或紅色熒光的還原產(chǎn)物，反映所研究的細(xì)胞或微生物對(duì)氧分子的消耗，因而常被用作氧化還原指示劑，以顯示被觀察細(xì)胞和細(xì)菌的代謝活動(dòng)。

這種測(cè)定是基于具有代謝活性的細(xì)胞將試劑轉(zhuǎn)換成熒光和比色指示劑的能力。在細(xì)胞增殖過(guò)程中，細(xì)胞內(nèi)NADPH/NADP、FADH/FAD、FMNH/FMN和NADH/NAD的比值升高，處于還原環(huán)境。攝入細(xì)胞內(nèi)的染料被這些代謝中間體及細(xì)胞色素類(lèi)還原后釋放到細(xì)胞外并溶于培養(yǎng)基中，使培養(yǎng)基從無(wú)熒光的靛青藍(lán)變成有熒光的粉紅色。受損和無(wú)活性細(xì)胞具有較低的天然代謝活性，因此對(duì)應(yīng)的信號(hào)較低?？梢杂闷胀ǚ止夤舛扔?jì)或熒光光度計(jì)檢測(cè)，其激發(fā)光波長(zhǎng)在530-560 nm之間，發(fā)射光波長(zhǎng)為590 nm。吸光度和熒光強(qiáng)度與活性細(xì)胞數(shù)成正比。

產(chǎn)品特點(diǎn)

本品可廣泛地用于細(xì)胞增殖代謝，藥物的細(xì)胞毒作用的體外測(cè)定以及病原微生物的的快速檢測(cè)與鑒定。 與臺(tái)盼蘭、TTC、MTT、MTS等分析法相比，Alamar Blue具有更多的優(yōu)勢(shì)。Alamar Blue采用單一試劑，可以連續(xù)、快速地檢測(cè)細(xì)胞的增生狀態(tài)。由于Alamar Blue對(duì)細(xì)胞無(wú)毒、無(wú)害，不影響細(xì)胞的抗體合成與分泌等活性，因此可以對(duì)同一批細(xì)胞的增生狀態(tài)進(jìn)行連續(xù)觀察和進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)觀察，因此有操作簡(jiǎn)便和幾乎不干擾細(xì)胞正常代謝的特點(diǎn)。 

運(yùn)輸與保存方法 

冰袋運(yùn)輸。4oC避光保存，一年有效。

使用方法

一、制作標(biāo)準(zhǔn)曲線（測(cè)定最佳孵育時(shí)間和細(xì)胞數(shù)量）

1、每孔加入100微升細(xì)胞懸液（對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞），對(duì)細(xì)胞計(jì)數(shù)。按比例依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個(gè)細(xì)胞濃度梯度，一般要做3-5個(gè)細(xì)胞濃度梯度，每個(gè)濃度建議3-6個(gè)復(fù)孔。

注：設(shè)置陰性對(duì)照：細(xì)胞培養(yǎng)基中不加入細(xì)胞；陽(yáng)性對(duì)照：100微升100%還原型Alamar Blue（不含細(xì)胞）。

2、每孔加入10微升Alamar Blue。陽(yáng)性對(duì)照孔中加入10微升無(wú)菌的超純水。

3、放入細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)（37℃,5% CO2）一定時(shí)間。培養(yǎng)基的顏色由靛青藍(lán)開(kāi)始變成粉紅色就可以進(jìn)入下一步。

4、繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

二、細(xì)胞毒性和細(xì)胞增殖檢測(cè)

1、每孔加入100微升細(xì)胞懸液（對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞），對(duì)細(xì)胞計(jì)數(shù)。建議細(xì)胞數(shù)量為104/mL，具體每孔需要的細(xì)胞數(shù)量，需根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型決定。

2、 細(xì)胞中加入待檢測(cè)藥物，為檢測(cè)藥物對(duì)細(xì)胞增殖的作用，請(qǐng)?jiān)O(shè)置合適的對(duì)照組，包括刺激細(xì)胞和非刺激細(xì)胞。

3、混勻，放入細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)孵育（37℃，5% CO2）一段時(shí)間。

4、每孔加入10微升Alamar Blue。陽(yáng)性對(duì)照孔中加入10微升無(wú)菌的超純水。

5、放入細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)孵育（37℃，5% CO2）4 - 8 h，最佳孵育時(shí)間取決于細(xì)胞類(lèi)型。培養(yǎng)基的顏色由靛青藍(lán)開(kāi)始變成粉紅色就可以進(jìn)入下一步。

6、推薦用熒光分光光度計(jì)檢測(cè)，激發(fā)光波長(zhǎng)在530-560 nm之間，發(fā)射光波長(zhǎng)為590 nm。

7、普通分光光度計(jì)在570nm測(cè)定吸光度，參考波長(zhǎng)600 nm。也可用570/630 nm和540/600 nm替代。

常見(jiàn)問(wèn)題

Q：還原率的計(jì)算其中一步是還原型陽(yáng)性對(duì)照熒光值減去陰性對(duì)照的熒光值，減去后成負(fù)值？

A：陽(yáng)性對(duì)照的值比實(shí)驗(yàn)組高，需要重新制備。陽(yáng)性對(duì)照是100%還原的，高溫使得阿爾瑪藍(lán)變成還原態(tài)的。

Q：Alamar Blue 阿爾瑪藍(lán),使用是需要高壓滅菌是吧?

A: 阿爾瑪藍(lán)本身是無(wú)菌的。只有制備還原型的時(shí)候需要滅菌。不能對(duì)濃縮的Alamar Blue高壓滅菌。

相關(guān)產(chǎn)品