產(chǎn)品概述

Rhodamine 123（Rh123）作為一種在細(xì)胞生物學(xué)研究中被廣泛運(yùn)用的熒光染料，具有的性質(zhì)和重要的應(yīng)用價(jià)值。它能夠選擇性地在活細(xì)胞的線粒體內(nèi)積聚，因此常被用于對(duì)線粒體功能及細(xì)胞活力的研究。Rh123在化學(xué)性質(zhì)方面表現(xiàn)得極，屬于親脂性陽(yáng)離子染料，憑借其脂溶性可輕松透過(guò)細(xì)胞膜，并借助線粒體膜電位在線粒體內(nèi)積累。從光學(xué)角度來(lái)看，當(dāng)激發(fā)波長(zhǎng)為488 nm時(shí)，Rh123被激活，在530 nm處會(huì)發(fā)出強(qiáng)烈的綠色熒光。由于具有高量子的熒光發(fā)射效率，Rh123能夠產(chǎn)生高對(duì)比度的熒光信號(hào)，從而成為細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中極為有用的工具。

產(chǎn)品應(yīng)用

細(xì)胞活力測(cè)定：通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的Rh123熒光強(qiáng)度，可以評(píng)估細(xì)胞的活力狀態(tài)。

線粒體功能檢測(cè)：Rh123的熒光強(qiáng)度與線粒體膜電位成正比，可用于評(píng)估線粒體是否處于健康狀態(tài)。

藥物篩選：可用于篩選影響線粒體功能的藥物，評(píng)估藥物對(duì)細(xì)胞生理功能的影響。

溶液的配制

用 DMSO 溶解，終濃度為1 - 5 mM。溶液分裝，避光保存于-20oC。

使用方法

1、用載玻片準(zhǔn)備細(xì)胞。細(xì)胞數(shù)目應(yīng)為5×104～5×105個(gè)/mL。

2、孵育該載玻片，用PBS或Hanks液洗滌細(xì)胞。

3、用培養(yǎng)基稀釋Rh123母液以制備1～20 µM Rh123緩沖液。具體工作濃度取決于細(xì)胞類型和細(xì)胞濃度。

4、將Rh123緩沖液加入載玻片并在37℃下孵育30 min至1小時(shí)。

5、去除Rh123緩沖液并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞（洗滌細(xì)胞后為了固定，加入10%福爾馬林緩沖液并孵育15～20 min，接著用PBS洗滌）。

6、用帶有熒光素濾光片的熒光顯微鏡觀察細(xì)胞。

常見(jiàn)問(wèn)題

1. 染色不足的原因

可能是染料濃度過(guò)低或孵育時(shí)間不足。可以適當(dāng)增加Rh123濃度或延長(zhǎng)孵育時(shí)間。

2. 過(guò)度染色的原因

染料濃度過(guò)高或孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，會(huì)引起非特異性染色。可嘗試降低 Rh123濃度或縮短孵育時(shí)間。

3. 線粒體熒光信號(hào)弱的處理方式

①可能是細(xì)胞狀態(tài)不佳或線粒體功能受損。

②對(duì)于線粒體含量較少的細(xì)胞，可以使用較高的染料濃度和較長(zhǎng)的孵育時(shí)間

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