神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞；H4操作步驟:

1、貼壁細(xì)胞的消化

①吸除培養(yǎng)液，用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次，以去除殘余的血清。

②加入少量生物 Trypsin-EDTA solution，略蓋過細(xì)胞即可，室溫放置 0.5～2min， 不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。

③顯微鏡下觀察，細(xì)胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變

化；或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來，吸除細(xì)胞消化液。加入含血清的  *細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下細(xì)胞，即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

④如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。

⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過長，未及吹打細(xì)胞，細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落， 直接用細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來。1000～2000g 離心 1min，沉淀細(xì)胞，盡量去除細(xì)胞消化液后，加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。

在組織的消化過程中，首先需將選取的組織樣本剪切成細(xì)小的碎片，以便于消化酶更好地滲透和作用。隨后，將這些碎片轉(zhuǎn)移至含有適量生物 Trypsin-EDTA solution 或其他適宜組織消化酶的容器中，根據(jù)組織的類型和硬度，消化時(shí)間可從數(shù)分鐘至數(shù)小時(shí)不等，期間需不時(shí)觀察并輕柔振蕩，以促進(jìn)消化均勻進(jìn)行。

當(dāng)觀察到組織碎片已明顯分散成單個(gè)細(xì)胞或較小的細(xì)胞團(tuán)塊時(shí)，表明消化過程基本完成。此時(shí)，應(yīng)立即終止消化，可通過加入含有血清的細(xì)胞培養(yǎng)液來中和消化酶。使用吸管或移液器輕輕吹打消化液，以促進(jìn)細(xì)胞進(jìn)一步分散。

之后，將含有消化后細(xì)胞的懸液通過細(xì)胞篩網(wǎng)過濾，以去除未消化的組織碎片和雜質(zhì)。接著，將過濾后的細(xì)胞懸液進(jìn)行離心處理，轉(zhuǎn)速同樣控制在1000～2000g，離心時(shí)間1～2分鐘，以沉淀細(xì)胞。離心后，小心吸除上清液，再加入含血清的培養(yǎng)液，輕輕吹打重懸細(xì)胞，使其達(dá)到適宜的濃度和活性狀態(tài)，為后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作如細(xì)胞培養(yǎng)、分析或分離特定類型細(xì)胞等做好準(zhǔn)備。