液相色譜柱壽命有限，即使在做到良好的清洗和儲(chǔ)存之后也難逃到達(dá)壽命終點(diǎn)的事實(shí)。但是，我們還是可以采取一些措施來(lái)最大限度地延長(zhǎng)使用液相色譜柱的壽命。

我們所有的液相色譜柱出庫(kù)時(shí)都儲(chǔ)存于特定的出廠溶劑中。對(duì)于反相色譜柱，該溶劑通常由有機(jī)物（乙腈或甲醇）和水組成。在安裝之前，需要先用流動(dòng)相對(duì)色譜柱進(jìn)行沖洗，然后進(jìn)行安裝，最后再用流動(dòng)相調(diào)節(jié)色譜柱之后再進(jìn)行相關(guān)分析。

對(duì)于在反相和正相條件下都可以使用的色譜柱，需要特別關(guān)注出廠溶劑并確認(rèn)流動(dòng)相與出廠溶劑混溶/兼容。如果不兼容，則需要進(jìn)行溶劑切換。

準(zhǔn)備使用色譜柱時(shí)，可以通過(guò)安裝在線過(guò)濾器、捕集柱和保護(hù)柱來(lái)幫助保持其完整性。這些有助于防止污染物損壞我們要使用的 HPLC 分析柱。但是，當(dāng)污染確實(shí)發(fā)生時(shí)，還是可以采取一些方法進(jìn)行應(yīng)對(duì)。

清洗液相色譜柱

色譜柱在使用之后，存放之前，建議對(duì)其進(jìn)行一定的清洗。清洗程序通常包括使用相似色譜柱上最后一次使用的溶劑組成（等度/梯度）對(duì)其清洗，其中需要用超純水代替緩沖液，以確保從色譜柱中去除緩沖液成分。還可以適當(dāng)增加清洗液中的有機(jī)物百分比，以進(jìn)一步去除任何疏水性雜質(zhì)。

反沖液相色譜柱

如果發(fā)現(xiàn)峰形變差并且伴隨背壓增加，建議對(duì)色譜柱進(jìn)行反向沖洗。在反向沖洗之前，重要的是要確保流動(dòng)相或柱內(nèi)溶劑與清洗溶劑混溶，并且流速不超過(guò)色譜柱推薦流速的一半。有關(guān)詳細(xì)步驟，請(qǐng)按照色譜柱保養(yǎng)指南中提到的說(shuō)明進(jìn)行操作。一般可以使用以下公式確定色譜柱清洗液體積：V = pr2L, 其中 V 是以 mL 為單位的色譜柱體積，r 是以 cm 為單位的色譜柱半徑，L 是以 cm 為單位的色譜柱長(zhǎng)度。

在使用完成后正確清洗反相 HPLC 色譜柱時(shí)，首先將流動(dòng)相更換為 95% 超純水和 5% 乙腈，然后以大約 10 倍的柱體積和推薦流速的一半速度對(duì)色譜柱進(jìn)行沖洗以清除任何留在 色譜柱中的緩沖液。然后還可以根據(jù)需要逐步改變清洗液的配比，將有機(jī)物含量增加到約 95% 乙腈和 5% 水。

反沖過(guò)后，在使用前需要將色譜柱正向連接并且用流動(dòng)相調(diào)節(jié)色譜柱。

請(qǐng)注意！

在反向沖洗色譜柱時(shí)，請(qǐng)斷開色譜柱與檢測(cè)器的連接。了解如何使用這些技巧正確地反向沖洗色譜柱。

液相色譜柱的保存

色譜柱使用后的正確存放也很重要，尤其是當(dāng)要存放很長(zhǎng)時(shí)間的時(shí)候。當(dāng)色譜柱中仍含有一些緩沖液或離子對(duì)試劑時(shí)，請(qǐng)務(wù)必不要將其存放起來(lái)。需用不含緩沖液的流動(dòng)相以五倍柱體積的量來(lái)沖洗色譜柱。對(duì)于具有離子對(duì)試劑的色譜柱，需要延長(zhǎng)清洗時(shí)間以將它們從色譜柱中去除。清洗后，將反相色譜柱保存在乙腈/水 (65:35 v/v) 中，甲醇可以代替乙腈，正相色譜柱保存在 100% 正己烷或 IPA 中，離子交換柱保存在 100% 甲醇中，HILIC 色譜柱保存在乙腈/水 (80:20 v/v) 溶液中。