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顯微課堂 | 當(dāng)心“無(wú)效”放大率
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通過(guò)光波確定限值
但是，表現(xiàn)光學(xué)顯微鏡性能的不僅僅有放大率，還有分辨率。分辨率指對(duì)兩個(gè)緊密相鄰的點(diǎn)分辨的能力。根據(jù)瑞利（Rayleigh）定律，能夠分別成像的兩個(gè)點(diǎn)之間的最小距離大約相當(dāng)于光波長(zhǎng)的一半。
λ=光波長(zhǎng)
n=標(biāo)本和物鏡之間的介質(zhì)的折光率
α=物鏡孔徑角的一半
因此，對(duì)于藍(lán)光，分辨率限值約為d=0.2μm；對(duì)于紅光，d=0.35μm左右。UV物鏡的分辨率略低于0.2μm。肉眼無(wú)法區(qū)分小于0.2mm的結(jié)構(gòu)。
n×sin α的數(shù)值對(duì)應(yīng)于數(shù)值孔徑（NA），即表示聚光能力和物鏡分辨率的量度。由于孔徑角不能超過(guò)90°，折光率永遠(yuǎn)大于等于1（nair=1），所以大氣中的NA始終在1左右。如果采用油浸的方式（n>1），數(shù)值孔徑將增加（達(dá)到約1.45），分辨率也將隨之升高。
圖1：可見(jiàn)光光譜
因此，對(duì)于藍(lán)光，分辨率限值約為d=0.2μm；對(duì)于紅光，d=0.35μm。UV物鏡的分辨率略低于0.2μm。肉眼無(wú)法區(qū)分小于0.2mm的結(jié)構(gòu)。
圖2：物鏡的數(shù)值孔徑?jīng)Q定了圖像的具體分辨率和亮度
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放大率并非越大越好
為了使人眼能夠觀察到顯微分辨率，目鏡中出現(xiàn)的圖像應(yīng)具有相應(yīng)的放大率。分辨率和放大率始終直接相關(guān)。放大率低的物鏡具有低數(shù)值孔徑，因此分辨率低。
高倍物鏡的數(shù)值孔徑也很高，如果是40倍干式物鏡，則數(shù)值孔徑通常為0.8。但由于數(shù)值孔徑增加到某個(gè)特定點(diǎn)后無(wú)法繼續(xù)增加，所以在傳統(tǒng)的光學(xué)顯微鏡中，可用的放大范圍也是有限的。“有用”的顯微鏡放大率在500×NA和1000×NA之間。
一些光學(xué)顯微鏡聲稱具有極大的放大率，但實(shí)際上最高還不到1400倍。專(zhuān)家將超出該范圍的一切倍率都稱作“無(wú)效放大率”。雖然看似放大了結(jié)構(gòu)，但并沒(méi)有進(jìn)一步分辨細(xì)節(jié)部分。
圖3：含10%鈷的硬質(zhì)合金（亞微米結(jié)構(gòu)，初始晶粒度為0.6µm)，用于生產(chǎn)重型工具。左：通過(guò)干式物鏡觀察，NA=0.90，右圖：通過(guò)油浸物鏡觀察，NA=1.30（由Konrad Friedrichs GmbH & Co KG, Kulmbach, Germany提供
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