具體合成過(guò)程如下：

1、去維護(hù)：Fmoc 維護(hù)的柱子和單體有必要用一種堿性溶劑（ piperidine ）去除氨基的維護(hù)基團(tuán)。

2、激活和交聯(lián)：下一個(gè)氨基酸的羧基被一種激活劑所激活溶解，激活的單體與游離的氨基在交聯(lián)劑的作用下交聯(lián)，構(gòu)成肽鍵。

3 、循環(huán)：這兩步反響重復(fù)循環(huán)直到整條肽鏈合成結(jié)束。

4 、洗脫和脫維護(hù)：依據(jù)肽鏈所含的殘基不一樣，用不一樣的脫樹(shù)脂溶劑從柱上洗脫下來(lái)，其維護(hù)基團(tuán)被一種脫維護(hù)劑（ TFA ）洗脫和脫維護(hù)。

多肽是復(fù)雜的大分子，因而每條序列在物理和化學(xué)特性上都是共同的，有些多肽合成很艱難 ，另有些多肽雖然合成相對(duì)簡(jiǎn)單，但純化艱難；最常見(jiàn)的疑問(wèn)是很多肽不溶于水溶液，因而在純化中，這些疏水肽有必要溶于非水溶劑中或特別的緩沖液，而這些溶劑或緩沖液很也許不適合應(yīng)用于生物試驗(yàn)體系，因而研究人員不能運(yùn)用該多肽到達(dá)自個(gè)的意圖，因而下面是關(guān)于研究人員規(guī)劃多肽的一些建議。

怎么下降肽鏈合成的難度？

1.削減序列長(zhǎng)度

因?yàn)殡牡拈L(zhǎng)度添加會(huì)致使粗產(chǎn)品純度下降，小于15個(gè)殘基的肽對(duì)比簡(jiǎn)單得到較高純度的初產(chǎn)品，當(dāng)肽鏈長(zhǎng)度添加到20個(gè)殘基以上時(shí)，準(zhǔn)確產(chǎn)品的量即是一個(gè)首要思考的疑問(wèn)。在很多試驗(yàn)中，下降殘基數(shù)低于20 往往能得到非常好的試驗(yàn)成果。

2.削減疏水性殘基數(shù)

疏水性殘基占顯著優(yōu)勢(shì)的肽，尤其在距C端7-12個(gè)殘基的區(qū)域，常常導(dǎo)致合成艱難。這一般被認(rèn)為是因?yàn)楹铣芍袠?gòu)成b折疊片，這么會(huì)發(fā)生不配對(duì)。用1個(gè)或幾個(gè)極性殘基置換 或參加Gly或Pro以翻開(kāi)肽構(gòu)造也許會(huì)有協(xié)助。

3.削減“艱難”殘基

有多個(gè)Cys 、Met 、Arg 、Try 殘基一般難于合成。Ser一般可作為Cys的非氧化更換。

怎么增強(qiáng)肽鏈的可溶性？

1、改動(dòng)N端或C端

關(guān)于酸性肽(即pH值為7時(shí)帶負(fù)電荷), 咱們引薦乙?；?N端乙酰化, C端堅(jiān)持自在羧基),以添加負(fù)電荷。而關(guān)于堿性肽(即pH值為7時(shí)帶正電荷),咱們引薦氨基化(N端自在氨基, C端氨基化),以添加正電荷。

2、縮短或加長(zhǎng)序列

某些序列富含很多疏水氨基酸，如Trp 、Phe、Val、Ile 、Leu 、Met 、Tyr 和 Ala等 ，當(dāng)這些疏水殘基大于50%一般難于溶解。為了添加肽的極性，加長(zhǎng)序列也許會(huì)有協(xié)助。別的一種選擇是經(jīng)過(guò)削減疏水殘基的辦法下降肽鏈的長(zhǎng)度以添加極性。肽鏈極性越高，就越有也許溶于水。

3、參加可溶性殘基

關(guān)于某些肽鏈而言，加上一些極性氨基酸能改進(jìn)可溶性。咱們引薦給酸性肽的N端或C端加上Glu-Glu。給堿性肽的N端或C端加上Lys-Lys假如不能參加帶電荷基團(tuán),能夠?qū)?Ser-Gly-Ser 加到N端或C端。但是，肽鏈的兩頭不能改動(dòng)時(shí)，該辦法則不可行。

4、經(jīng)過(guò)置換一個(gè)或多個(gè)殘基改動(dòng)序列

肽鏈的可溶性可經(jīng)過(guò)改動(dòng)序列內(nèi)某些殘基來(lái)改進(jìn)。一般單個(gè)殘基的更換就能明顯改進(jìn)其疏水性，而這種改動(dòng)一般是較為保存的，如用Gly替代Ala 。

5、經(jīng)過(guò)選用不一樣“結(jié)構(gòu)”來(lái)改動(dòng)序列

假如能用某個(gè)序列來(lái)制備很多長(zhǎng)度一定的彼此串連或堆疊的多肽，則能夠用改動(dòng)各個(gè)多肽起始點(diǎn)的辦法來(lái)完成改動(dòng)序列的意圖。其原理是：在同一多肽的親水和疏水殘基間創(chuàng)造新的非常好的平衡，或?qū)⑼欢嚯膬?nèi)的“艱難”殘基(比方 2個(gè)Cys) 放進(jìn)兩個(gè)不一樣的多肽而不是集于同一分子內(nèi)。