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隨著低分子藥物逐漸被抗體藥物等生物藥物所取代，中分子藥物正在逐漸被人們所關注，雖然這些生物藥物展現(xiàn)出了許多優(yōu)勢，但也面臨一些難題，例如制造成本高以及由于分子量大而難以進入細胞內部等問題。為了解決這些難題，中分子藥物受到了廣泛關注，通過肽合成產生的多肽類藥物是中分子藥物的一種。在多肽類藥物的生產質控中，氨基酸序列的測定是非常重要的檢測項目。對于常規(guī)組成單一的合成多肽藥物來說，氨基酸序列的分析較為簡單，可通過Edman降解法或質譜法進行測定，其中Edman降解法被認為更加直接可靠。

島津最新款蛋白測序儀PPSQ-51A/53A等度系列以Edman降解法為基礎，將蛋白質N-端順次切斷進行序列分析，產品具有靈敏度高、等度洗脫、簡便數(shù)據(jù)處理（差減色譜圖）、符合FDA 21 CFR part11規(guī)定、自動生成報告、長序列分析等特點，可以實現(xiàn)更靈敏、更可靠的蛋白質N-端端氨基酸序列分析，能夠滿足用戶對微量樣品氨基酸序列的蛋白質鑒定分析的各種需求。

【應用案例】

PPSQ-51A/53A等度系列在進行醋酸格拉提雷分析中的應用

應用介紹

醋酸格拉提雷是由四種氨基酸（L-谷氨酸（Glu）、L-丙氨酸（Ala）、L-酪氨酸（Tyr）、L-賴氨酸（Lys））構成的、具有隨機排列特性的多肽混合物，其平均分子量在5000到9000之間。通過對醋酸格拉提雷的氨基酸組成進行分析，已經確認了各氨基酸的摩爾比例。使用蛋白測序儀對醋酸格拉提雷的氨基酸序列進行分析時，由于醋酸格拉提雷是具有隨機排列特性的多肽，雖然不能直接定量各氨基酸，但可以通過計算每種組成氨基酸的比率，從而確定N末端各氨基酸的摩爾比例。

例如，Glu的相對摩爾含量為：

Glu 相對摩爾含量=mol(Glu) / mol(Glu)+ mol(Ala)+ mol(Tyr)+ mol(Lys)

樣品制備及分析（等度系統(tǒng)）

使用的醋酸格拉提雷樣品為 Tront Research Chemicals Inc. 公司生產（代碼：G406800）。將準備好的醋酸格拉提雷溶解于乙腈 / 0.1% 三氟乙酸水溶液 = 1:1 (體積比) 的混合溶液中，制備成濃度為 2 µg/µL 的樣品溶液。

圖1分析結果（色譜圖）

將制備的樣品溶液 3 µL 使用蛋白序列分析儀 PPSQ-51A/53A 等度系統(tǒng)進行了氨基酸序列分析。樣品保持體采用了聚偏二氟乙烯（PVDF）膜，分析結果（色譜圖）如圖1所示。

圖2各循環(huán)中構成氨基酸殘基的摩爾比（PVDF膜） 左：摩爾比的表格 右：摩爾比的圖表

使用制備的樣品溶液進行了相同的分析三次，圖2顯示了使用PVDF膜的分析結果，圖中的左側表格顯示了從色譜圖中獲得的每種氨基酸的產量除以四種氨基酸總量的值（摩爾比），使用PVDF膜進行的三次摩爾比分析中，獲得了良好的重現(xiàn)性結果（圖中的右側）。

結論

本案例涉及使用蛋白序列分析儀 PPSQ-51A/53A 等度系統(tǒng)對由Glu（谷氨酸）、Ala（丙氨酸）、Tyr（酪氨酸）、Lys（賴氨酸）這四種氨基酸組成的具有隨機序列的多肽復雜混合物——醋酸格拉提雷進行的分析。我們計算了所得PTH-氨基酸的產率比例，并確定了前5個循環(huán)中從N端部分獲得的每種氨基酸的相對摩爾比。

雖然氨基酸組成分析可以確定所有氨基酸的組成，但在確定末端部分的氨基酸組成方面存在困難，同時也證明使用蛋白序列分析儀 PPSQ-51A/53A 等度系統(tǒng)在對于醋酸格拉提雷的N端部分的質量控制是有益的。

關聯(lián)儀器

蛋白測序儀PPSQ-51A/53A等度系列

①分析穩(wěn)定性：蛋白測序儀PPSQ-51A/53A等度系列等度分離苯乙內酰硫脲（PTH-氨基酸）。此舉改進了基線穩(wěn)定性并支持苯乙內酰硫脲 （PTH-氨基酸）的高靈敏度分析。等度序列分析提供更穩(wěn)定的保留時間，因此，可采用差減色譜圖處理取消前述周期檢測到的峰值，更容易識別序列。

②簡單方便的數(shù)據(jù)分析：使用蛋白質測序儀PPSQ-51A/53A等度系列的專用軟件可方便地進行序列分析所需色譜圖的后期處理、多個色譜圖的疊加以及氨基酸序列的自動推測。

③符合FDA21 CFR Part 11規(guī)定：實驗室所使用的設備，需要符合計算機系統(tǒng)化驗證(CSV)、FDA 21 CFR Part11, PIC/S GMP指南、日本厚生勞動省電子記錄/電子署名相關的政策等規(guī)定。通過安全策略、系統(tǒng)策略、用戶權限及用戶管理功能等手段，可在高效地運用系統(tǒng)的同時，實現(xiàn)符合這些限制條件的要求。

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