摘要本應(yīng)用簡(jiǎn)報(bào)介紹了使用 Agilent 1260 Infinity II 液相色譜與 Agilent Ultivo 三重四極桿 LC/MS (LC/TQ) 的聯(lián)用系統(tǒng)定量分析蜂蜜樣品中的低納克級(jí) 2-AFGP。此方法采用 Ultivo LC/TQ 開(kāi)發(fā)，該系統(tǒng)體積小巧，但結(jié)果毫不遜色。此方法是食品行業(yè)在蜂蜜生產(chǎn)、加工和商業(yè)檢測(cè)中進(jìn)行常規(guī)分析的理想選擇，也十分適合用于學(xué)術(shù)研究目的。采用簡(jiǎn)單的液液萃取 (LLE) 樣品前處理方法，能夠成功實(shí)現(xiàn)基質(zhì)中 2-AFGP 的0.005 mg/kg 定量限 (LOQ)。

前言蜂蜜是由蜜蜂生產(chǎn)的一種口味鮮美、營(yíng)養(yǎng)豐富的食物，因具有抗氧化、抗菌和抗炎等特性而被廣泛食用。然而，由于蜂蜜價(jià)格相對(duì)較高、產(chǎn)量有限、成分復(fù)雜，經(jīng)常成為摻假的對(duì)象，損害了消費(fèi)者的權(quán)益和生廠(chǎng)商的利益。最常見(jiàn)的蜂蜜摻假行為是在純蜂蜜中添加糖漿，包括大米糖漿。此外，給蜜蜂喂食糖漿以提高產(chǎn)量和利潤(rùn)也是一種間接的摻假行為。

AFGP（2-乙?；秽?3-吡喃葡萄糖苷，也稱(chēng) SMR）是大米糖漿的特異性標(biāo)志物，可以像其他糖類(lèi)標(biāo)志物一樣使用穩(wěn)定碳同位素比值法、脈沖安培檢測(cè)法、LC-IRMS（液相色譜-同位素比值質(zhì)譜法）、紅外光譜法 (IR)、TLC、GC/MS 和NMR 進(jìn)行檢測(cè)。然而，這些傳統(tǒng)方法費(fèi)時(shí)費(fèi)力，有時(shí)還會(huì)出現(xiàn)矛盾或假陰性結(jié)果。三重四極桿 LC/MS 系統(tǒng)是美國(guó)、歐盟、FSSAI 和其他國(guó)家/地區(qū)用于確認(rèn)蜂蜜中污染物和摻假物的金標(biāo)準(zhǔn)。本應(yīng)用采用最新款三重四極桿 LC/MS 系統(tǒng) UltivoLC/TQ，獲得的靈敏度高于食品監(jiān)督管理局規(guī)定的安全限值要求。

實(shí)驗(yàn)條件本實(shí)驗(yàn)使用乙腈 (Honeywell, LC/MS,34967)、甲醇 ( H o n ey w e l l , LC / M S34966)、水 (Millipore)、甲酸 (Honeywell,LC/MS 56302)、2-乙?；秽?3-吡喃葡萄糖苷（TRC Canada，部件號(hào) G596874）和安捷倫 0.2 µm PVDF 針頭過(guò)濾器（部件號(hào) 5191-5924）。儲(chǔ)備液采用甲醇配制，2-AFGP 工作稀釋液采用水配制。萃取取 1 g 蜂蜜進(jìn)行樣品前處理。步驟如下：用水稀釋?zhuān)x心，將上清液過(guò)濾后進(jìn)樣至LC/MS（萃取成本更低）。詳細(xì)流程如圖 2 所示。

儀器本實(shí)驗(yàn)使用的儀器包括 Agilent 1260Infinity II 四元泵 (G7104C)、Agilent1260 Infinity II 樣品瓶進(jìn)樣器 (G7129C)、Agilent 1260 Infinity II 高容量柱溫箱(G7116A)、配備 AJS 離子源的 UltivoLC/TQ (G6465B)。LC 和 MS 參數(shù)如表 1和表 2 所示。

結(jié)果與討論從預(yù)加標(biāo) 0.05 mg/kg (50 ppb) SMR 的蜂蜜樣品和空白蜂蜜萃取物的 MRM 圖中可以看出，SMR 很容易檢出（圖 3）。印度食品安全指南 (FSSAI) 規(guī)定的檢測(cè)濃度為 1 mg/kg，而使用 Ultivo LC/TQ 的方法 LOQ 為 0.005 mg/kg。此外，通過(guò)進(jìn)樣各種 SMR 濃度下的蜂蜜樣品，獲得了可重現(xiàn)的洗脫曲線(xiàn)，如圖 4 所示。