隨著癌癥治療領(lǐng)域的不斷創(chuàng)新，免疫細(xì)胞療法（Immune Cell Therapy）逐漸成為一種備受關(guān)注的治療方法，旨在通過激活或增強(qiáng)患者自身的免疫系統(tǒng)來對(duì)抗癌癥。這類療法的核心思想是利用免疫細(xì)胞的天然殺傷功能，增強(qiáng)其對(duì)癌細(xì)胞的識(shí)別和清除能力。免疫細(xì)胞療法有多種形式，常見的包括細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞療法、T細(xì)胞療法、CAR-T細(xì)胞療法（嵌合抗原受體T細(xì)胞療法）、CAR-NK細(xì)胞療法（嵌合抗原受體自然殺傷細(xì)胞療法）等。

其中，CAR-T（Chimeric AntigenReceptor T-Cell immunotherapy）細(xì)胞療法是一種通過將患者的T細(xì)胞重新編程，使其表達(dá)針對(duì)特定腫瘤抗原的嵌合抗原受體（CAR），從而增強(qiáng)T細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的靶向識(shí)別和攻擊能力的治療方法。這種療法已在多種血液腫瘤（如急性淋巴細(xì)胞白血病、非霍奇金淋巴瘤等）中取得了顯著療效。

Keywords: CAR-T; Lentiviral; Lentiviral Vector；Tracer Lentivirus

一、CAR-T細(xì)胞療法的制備

一般來說，制備CAR-T細(xì)胞的過程可分為以下幾個(gè)關(guān)鍵步驟：

圖片來源：Dana-Farber Cancer Institute-CAR T-細(xì)胞臨床試驗(yàn)幫助多發(fā)性骨髓瘤患者恢復(fù)健康

分選（T細(xì)胞分離）

制備CAR-T細(xì)胞的第一步是從患者的外周血中的白血細(xì)胞分離出T細(xì)胞。通常采用免疫磁珠分選法或流式細(xì)胞術(shù)等技術(shù)，從血液中提取出富含CD3+的T細(xì)胞。為了確保細(xì)胞的純度，分選過程需要十分精細(xì)，確保得到足夠數(shù)量的高質(zhì)量T細(xì)胞。

激動(dòng)（T細(xì)胞激活）

提取出的T細(xì)胞在體外需要進(jìn)行激活，通常采用CD3/CD28活化擴(kuò)增試劑盒（CD3/CD28 T Cells Activation /Expansion Kit）來激活T細(xì)胞。激活后的T細(xì)胞會(huì)進(jìn)入活躍狀態(tài)，準(zhǔn)備進(jìn)行基因轉(zhuǎn)染。通過這一過程，T細(xì)胞的功能得到增強(qiáng)，有助于后續(xù)的基因改造和擴(kuò)增。

轉(zhuǎn)染（基因編輯）

激活后的T細(xì)胞將接受基因轉(zhuǎn)染，以使其表達(dá)嵌合抗原受體（CAR）。這一過程通常使用慢病毒載體（Lentiviral vector）將CAR基因?qū)氲絋細(xì)胞中。慢病毒是一種有效的基因轉(zhuǎn)導(dǎo)工具，其優(yōu)點(diǎn)在于能夠穩(wěn)定地將目標(biāo)基因（如CAR基因）整合入細(xì)胞基因組中。慢病毒通過感染T細(xì)胞并將CAR基因轉(zhuǎn)染進(jìn)T細(xì)胞的DNA中，使T細(xì)胞能夠長(zhǎng)期表達(dá)CAR。CAR基因包括一個(gè)抗體的單鏈可變片段（scFv），使T細(xì)胞能夠識(shí)別腫瘤細(xì)胞表面的特定抗原，并通過激活T細(xì)胞的信號(hào)傳導(dǎo)區(qū)域來啟動(dòng)免疫反應(yīng)。如圖2所示。慢病毒轉(zhuǎn)染具有高效、穩(wěn)定的特點(diǎn)，使得CAR基因能夠在T細(xì)胞中長(zhǎng)期表達(dá)。

圖片來源：Singapore CAR-T細(xì)胞療法

擴(kuò)增（細(xì)胞增殖）

轉(zhuǎn)染后的CAR-T細(xì)胞將進(jìn)入擴(kuò)增階段，通過添加IL-2等生長(zhǎng)因子促進(jìn)細(xì)胞增殖。此過程的目的是確保在最終注入患者體內(nèi)時(shí)，能夠提供足夠數(shù)量的CAR-T細(xì)胞。擴(kuò)增過程需在無菌的條件下進(jìn)行，保證細(xì)胞的質(zhì)量與數(shù)量。

質(zhì)控（質(zhì)量控制）

在回輸患者前。在制備過程中，質(zhì)量控制環(huán)節(jié)至關(guān)重要。制備出來的CAR-T細(xì)胞需進(jìn)行嚴(yán)格的檢測(cè)，以確保細(xì)胞的純度、活性、轉(zhuǎn)染效率等符合治療標(biāo)準(zhǔn)。此外，還需要檢測(cè)是否存在細(xì)胞污染或不良反應(yīng)，以確保細(xì)胞回輸入原患者體后的安全性和治療效果。

二、慢病毒轉(zhuǎn)染免疫細(xì)胞中的重要性

在免疫細(xì)胞療法中，慢病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)起到了至關(guān)重要的作用，尤其在基因編輯和細(xì)胞工程化的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。慢病毒載體的優(yōu)勢(shì)，使其成為當(dāng)前免疫細(xì)胞療法中最-廣泛使用的基因轉(zhuǎn)導(dǎo)工具。

慢病毒（Lentivirus）是一類能夠感染人類及其他哺乳動(dòng)物細(xì)胞的病毒類型，它來源于HIV-1，經(jīng)過安全改造后成為了研究人員轉(zhuǎn)導(dǎo)目標(biāo)基因的完-美工具。它隸屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒科， 逆轉(zhuǎn)錄病毒的特點(diǎn)是它們攜帶RNA基因組，并通過一種名為“逆轉(zhuǎn)錄酶”的蛋白將RNA轉(zhuǎn)錄成DNA，然后通過整合酶將DNA整合到宿主細(xì)胞的基因組中。由于慢病毒能把自身序列整合到宿主基因組，使得基因能長(zhǎng)期穩(wěn)定表達(dá)，并且能夠感染分裂和非分裂的細(xì)胞?？蒲腥藛T基于慢病毒這些特征，通過對(duì)慢病毒進(jìn)行了安全性改造，慢病毒的基因被分散在了三個(gè)質(zhì)粒，包裝質(zhì)粒（提供病毒的核心結(jié)構(gòu)蛋白gag和反轉(zhuǎn)錄酶pol），包膜質(zhì)粒（提供包膜糖蛋白VSV-G用于穿透細(xì)胞膜），以及帶有目標(biāo)基因的穿梭質(zhì)粒?？茖W(xué)家們還敲除了HIV-1的vif、vpr、vpu和nef基因， 以及在穿梭質(zhì)粒中3’LTR的U3序列，使HIV-1失去復(fù)制能力。使其無法在產(chǎn)生新的病毒顆粒，同時(shí)使用水泡性口炎病毒糖蛋白（VSV-G）替代了在包膜質(zhì)粒中的env編碼的包膜糖蛋白來擴(kuò)大慢病毒感染細(xì)胞的類型。在減少了生物安全風(fēng)險(xiǎn)后，已經(jīng)被用作基因?qū)氩溉閯?dòng)物細(xì)胞的載體，由于其具有高效、持久表達(dá)的特點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于基因治療、基因編輯和細(xì)胞生物學(xué)研究等領(lǐng)域。

圖片來源：product/ 慢病毒包裝以及慢病毒轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞過程示意圖

【高效的基因轉(zhuǎn)導(dǎo)能力】

慢病毒載體（Lentiviral vector）能有效地將目標(biāo)基因（如CAR基因）轉(zhuǎn)入免疫細(xì)胞中，并能夠?qū)⒒蚍€(wěn)定整合到細(xì)胞基因組中，使得CAR基因能夠在細(xì)胞分裂和增殖過程中持續(xù)表達(dá)。這種高效的轉(zhuǎn)染能力是確保免疫細(xì)胞療法成功的基礎(chǔ)。

【較低的免疫原性】

與其他病毒載體相比，慢病毒的免疫原性較低，因此使用慢病毒轉(zhuǎn)染免疫細(xì)胞時(shí)，患者的免疫系統(tǒng)對(duì)病毒的免疫反應(yīng)相對(duì)較弱。這有助于減少不良反應(yīng)，尤其是在細(xì)胞回輸后的長(zhǎng)期生存中，避免了過度的免疫排斥反應(yīng)。

【對(duì)免疫細(xì)胞的高適應(yīng)性】

慢病毒載體（Lentiviral vector）能夠有效轉(zhuǎn)染多種類型的免疫細(xì)胞，尤其適用于T細(xì)胞和NK細(xì)胞等。通過慢病毒的轉(zhuǎn)染，免疫細(xì)胞可以獲得針對(duì)腫瘤的特異性識(shí)別能力，從而增強(qiáng)其殺傷腫瘤的能力。

【轉(zhuǎn)染效應(yīng)細(xì)胞對(duì)靶細(xì)胞的精準(zhǔn)性】

在免疫細(xì)胞療法中，轉(zhuǎn)染效應(yīng)細(xì)胞是指那些通過轉(zhuǎn)染后能夠表達(dá)CAR并發(fā)揮抗腫瘤作用的免疫細(xì)胞。慢病毒能夠精準(zhǔn)地將CAR基因轉(zhuǎn)入這些效應(yīng)細(xì)胞，使其能夠識(shí)別并攻擊腫瘤靶細(xì)胞。靶細(xì)胞是指被這些免疫細(xì)胞識(shí)別并殺傷的腫瘤細(xì)胞。通過慢病毒轉(zhuǎn)染，免疫細(xì)胞可以增強(qiáng)對(duì)腫瘤細(xì)胞的特異性識(shí)別和殺傷能力，從而提高治療效果。

鑒于此，IPHASE作為體外研究生物試劑引-領(lǐng)者，為縮短免疫細(xì)胞療法客戶轉(zhuǎn)染的復(fù)雜性和提高基因穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的成功性，開發(fā)了慢病毒包裝試劑盒（Lentivirus Packaging Kit）及慢病毒濃縮液（Lentivirus Concentration Reagent），為客戶提供一站式解決方案！

三、IPHASE慢病毒產(chǎn)品

IPHASE慢病毒包裝試劑盒（IPHASE Lentivirus Packaging Kit）包含了進(jìn)行慢病毒包裝（Lentivirus Packaging）所需的全部核心試劑，極大簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)流程，節(jié)省了時(shí)間和精力。此試劑盒包括：

· Lentivirus Packaging Plasmid Mix

· Transfect Reagent

· eGFP Plasmid

· IPHASE Lentivirus Concentration Reagent

該試劑盒真正實(shí)現(xiàn)了精簡(jiǎn)試驗(yàn)！無需繁瑣的試劑準(zhǔn)備，僅需對(duì)照說明書便可高效完成慢病毒包裝。試劑盒的獨(dú)-特優(yōu)勢(shì)在于：包裝時(shí)間短、病毒濃度高、操作簡(jiǎn)便，非常適合慢病毒包裝的初學(xué)者使用。每一組試劑都經(jīng)過嚴(yán)格質(zhì)量檢測(cè)，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確、可靠、重現(xiàn)性強(qiáng)，從而顯著提高轉(zhuǎn)染效率和病毒載體的穩(wěn)定性，為您的免疫細(xì)胞制備提供強(qiáng)有力的技術(shù)支持。

此外，為節(jié)省客戶成本，IPHASE同時(shí)開發(fā)、生產(chǎn)了慢病毒濃縮液（Lentivirus Concentration Reagent），為廣大客戶提供了一種快捷、簡(jiǎn)便的濃縮解決方案。只需將慢病毒上清液與濃縮試劑混合，進(jìn)行簡(jiǎn)單的孵育步驟，再通過標(biāo)準(zhǔn)離心機(jī)離心，即可快速富集慢病毒顆粒。無須超速離心機(jī)，這對(duì)大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室用戶來說，是一個(gè)便捷且經(jīng)濟(jì)的選擇。

· 濃縮快速：濃縮過程僅需1小時(shí)即可完成。

· 提升滴度：該試劑能夠?qū)⒉《据d體滴度提高10-100倍，同時(shí)減少材料損失，確保您獲得高效的病毒載體。

· 簡(jiǎn)便易操作：操作簡(jiǎn)單，無需復(fù)雜設(shè)備和長(zhǎng)時(shí)間孵育，極大提升工作效率。

簡(jiǎn)而言之，IPHASE慢病毒濃縮液（Lentivirus Concentration Reagent）不僅能顯著提高轉(zhuǎn)染效率，還能為免疫細(xì)胞制備提供高質(zhì)量的病毒載體支持，是日常實(shí)驗(yàn)、臨床前研究及其他應(yīng)用領(lǐng)域不-可或-缺的優(yōu)異產(chǎn)品！

綜上所述，免疫細(xì)胞療法，特別是CAR-T細(xì)胞和CAR-NK細(xì)胞療法，代表了現(xiàn)代腫瘤治療的新方向。通過精細(xì)的細(xì)胞分選、激活、轉(zhuǎn)染、擴(kuò)增和質(zhì)控等工藝，科學(xué)家能夠?yàn)榛颊咧苽涑龈咝?、安全的免疫?xì)胞產(chǎn)品，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)腫瘤的精準(zhǔn)治療。而慢病毒轉(zhuǎn)染作為其中的核心技術(shù)，因其高效、穩(wěn)定的特性，在CAR-T和CAR-NK細(xì)胞的制備過程中起到了至關(guān)重要的作用。隨著技術(shù)的不斷進(jìn)步，免疫細(xì)胞療法有望為更多患者提供全新的治療選擇，帶來更大的臨床價(jià)值。隨著技術(shù)的不斷進(jìn)步，免疫細(xì)胞療法在未來有望為更多癌癥患者帶來革命性的治療希望。

與此同時(shí)，IPHASE為滿足基因轉(zhuǎn)導(dǎo)、基因表達(dá)和疾病研究等多個(gè)領(lǐng)域客戶的需求，不僅提供慢病毒包裝試劑盒和慢病毒濃縮液，還在客戶不同需求的基礎(chǔ)上分別使用綠色熒光蛋白（Green fluorescent protein， GFP）、紅色熒光蛋白mCherry和Luciferase熒光素酶對(duì)Lentivirus進(jìn)行包裝，形成示蹤病毒（Tracer Lentivirus），方便客戶對(duì)目標(biāo)細(xì)胞進(jìn)行體外和/或體內(nèi)的位置追蹤，確定目標(biāo)細(xì)胞靶向性！

GFP是從水母 Aequorea victoria 中提取的天然蛋白質(zhì)，能夠在紫外光或藍(lán)光的激發(fā)下發(fā)出明亮的綠色熒光，被廣泛用于細(xì)胞標(biāo)記和追蹤。通過將GFP基因包裝到Lentivirus中，研究人員能夠轉(zhuǎn)導(dǎo)GFP進(jìn)入體外實(shí)驗(yàn)中的目標(biāo)細(xì)胞基因，實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)目標(biāo)細(xì)胞，并通過熒光顯微鏡進(jìn)行可視化分析。mCherry是一種紅色熒光蛋白，廣泛應(yīng)用于雙標(biāo)記實(shí)驗(yàn)中，尤其在與GFP聯(lián)合使用時(shí)。mCherry的發(fā)射波長(zhǎng)較長(zhǎng)，在紅光激發(fā)下能夠發(fā)出明亮的紅色熒光。這使得它成為了與GFP等其他熒光標(biāo)記物配合使用的理想選擇。研究人員可通過同時(shí)使用GFP和mCherry示蹤病毒來轉(zhuǎn)導(dǎo)不同的細(xì)胞，研究人員可以在同一實(shí)驗(yàn)中觀察不同細(xì)胞的行為，為復(fù)雜的生物過程提供更多的可視化信息。因此，GFP和mCherry均為體外進(jìn)行目標(biāo)細(xì)胞實(shí)時(shí)追蹤監(jiān)測(cè)的有效熒光蛋白！

而Luciferase是一種能催化熒光素底物發(fā)光的酶，廣泛應(yīng)用于細(xì)胞和動(dòng)物模型中的基因表達(dá)檢測(cè)和動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)。Luciferase的優(yōu)勢(shì)在于，它不依賴于外源熒光染料，而是通過底物（熒光素D-Luciferin）和Luciferase產(chǎn)生反應(yīng)來產(chǎn)生可被檢測(cè)的光信號(hào)，Luciferase的發(fā)光信號(hào)具有高靈敏度和較長(zhǎng)的發(fā)光時(shí)間。Luciferase常用于體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，尤其是用于監(jiān)測(cè)腫瘤生長(zhǎng)、藥物反應(yīng)、感染過程等動(dòng)態(tài)生物學(xué)研究。

鑒于此，IPHASE為滿足不同客戶體外和/或體內(nèi)試驗(yàn)對(duì)于目標(biāo)細(xì)胞追蹤的要求，在此基礎(chǔ)上，開發(fā)了GFP和Luciferase及mCherry和Luciferase兩款已包裝好的示蹤用病毒，客戶可根據(jù)試驗(yàn)需求分別選擇示蹤病毒，也可搭配使用，省時(shí)省力，提高效率，是實(shí)時(shí)追蹤監(jiān)測(cè)目標(biāo)細(xì)胞動(dòng)態(tài)的又一大利器！

四、IPHASE免疫療法相關(guān)產(chǎn)品

除了應(yīng)用于CAR-T或CAR-NK等的慢病毒相關(guān)產(chǎn)品外，IPHASE作為體外研究生物試劑引-領(lǐng)者，在支持CGT創(chuàng)新療法等其它領(lǐng)域也不遺余力，開發(fā)生產(chǎn)了經(jīng)白細(xì)胞單采術(shù)分離的白細(xì)胞和PBMC及多種免疫細(xì)胞分離試劑盒，助力免疫細(xì)胞療法蓬勃發(fā)展！

IPHASE產(chǎn)品均具有以下優(yōu)勢(shì)，且每批次產(chǎn)品可為您出具IPHASE自行驗(yàn)證的COA數(shù)據(jù)。

安全性

IPHASE提供產(chǎn)品的捐獻(xiàn)者/動(dòng)物體均為健康供體，經(jīng)過預(yù)篩選，且病毒檢測(cè)為陰性（HIV-1/2,HBV,HCV,梅毒）。

合規(guī)性

IPHASE提供捐獻(xiàn)者簽署的知情同意書，來源清晰可溯源。

專業(yè)性

IPHASE提供的經(jīng)白細(xì)胞單采術(shù)所得的產(chǎn)品，均由專業(yè)人員操作執(zhí)行，每個(gè)批次的產(chǎn)品均提供相應(yīng)COA，且全程冷鏈運(yùn)輸，安全、快速保證產(chǎn)品質(zhì)量。

服務(wù)好

高質(zhì)量的售后服務(wù)，確保試驗(yàn)一路綠燈。

可定制

可根據(jù)客戶的特殊需求“專人專-供”。

IPHASE/匯智和源憑借多年的研發(fā)經(jīng)驗(yàn)，推出了多領(lǐng)域、多種類的高-端科研試劑，為藥物早期研發(fā)提供篩選工具，為生命科學(xué)領(lǐng)域的探索提供新材料、新方法和新手段，為食品、藥品、化學(xué)品等的遺傳毒性研究提供便捷產(chǎn)品，望廣大科研工作者咨詢。

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凡使用本公司產(chǎn)品，在國(guó)內(nèi)及國(guó)際刊物上發(fā)表論文（論文發(fā)表日起一年內(nèi)），并注明產(chǎn)品屬于IPHASE BIOSCIENCES Co.,Ltd. / 匯智和源生物技術(shù)（蘇州）有限公司所有，即可申請(qǐng)獎(jiǎng)勵(lì)。根據(jù)發(fā)表刊物影響因子不同，給予不同金額獎(jiǎng)品：

非SCI論文及IF≤5分，500元禮品；

5分＜IF≤8分 800元禮品；

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