【Biorbyt內(nèi)參專題】細胞器標志物

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細胞的生命活動依賴于其“細胞器”有條不紊地發(fā)揮各自的功能，不同細胞形態(tài)各異，細胞器組成上有一定的差異，但是主要細胞器組成單元是一樣的。

在Western Blotting中使用內(nèi)參，就是在WB過程中另外用內(nèi)參對應的抗體檢測內(nèi)參，這樣在檢測目的產(chǎn)物的同時可以檢測內(nèi)參的表達。由于內(nèi)參在各組織和細胞中的表達相對恒定，借助檢測每個樣品內(nèi)參的量就可以用于校正上樣誤差，這樣半定量的結(jié)果才更為可信。此外使用內(nèi)參可以作為空白對照，檢測蛋白轉(zhuǎn)膜情況是否*全、整個Western Blot顯色或者發(fā)光體系是否正常。

在Western Blotting實驗過程中，使用內(nèi)參的方法通常有以下三種：

1，是超級簡便的標記內(nèi)參使用法，只要在二抗孵育時加入HRP標記內(nèi)參抗體，按照正常操作即可。

2，普通內(nèi)參，當目的蛋白的分子量大小與選用的內(nèi)參蛋白分子量相差不大時，可以*進行目的蛋白的抗體溫育顯色和檢測，然后使用Strip緩沖液洗掉膜上的抗體，重新進行內(nèi)參蛋白的抗體溫育、顯色檢測。

3，當目的蛋白的分子量大小與選用的內(nèi)參蛋白分子量大小相差比較明顯情況下，可以在轉(zhuǎn)膜后預染，根據(jù)蛋白質(zhì)Marker的大小將膜剪為大分子量和小分子量兩部分，使內(nèi)參蛋白與目的蛋白分開，然后兩塊膜分別與內(nèi)參蛋白抗體和目的蛋白抗體進行溫育，二抗溫育以及顯色。一般我們選擇內(nèi)參與要檢測的目的蛋白的分子量*好相差5KD以上。因此要根據(jù)檢測的蛋白的分子量來選擇合適的內(nèi)參!