2025 年 AD600050 轉染試劑轉染 RAW264.7 細胞質粒的全新應用

RAW264.7 細胞質粒轉染試劑是一款具有創(chuàng)新性的新型小分子多肽轉染試劑，其du特之處在于進入細胞后能夠被代謝，對細胞無毒性作用，有效避免了細胞死亡的情況發(fā)生，并且不會激活細胞的免疫機制，為細胞實驗提供了更安全、穩(wěn)定的條件。

一、RAW264.7 細胞質粒轉染試劑產品詳情

Zeta Life 公司與美國加利福尼亞大學舊金山校區(qū)攜手合作，聯(lián)合開發(fā)出了用于哺乳動物細胞以及活體動物轉染的 Advanced DNA RNA 第三代多肽小分子轉染試劑。這一先進技術已成為蛋白功能研究、免疫細胞及干細胞治療、研發(fā)與生產等領域的關鍵核心技術。

Zeta Life 轉染試劑具備強大的轉染能力，能夠成功攻克那些極難轉染的免疫細胞和懸浮細胞，比如 T 細胞、NK 細胞、人淋巴細胞、THP-1 細胞等。同時，它還可以高效率地將 siRNA 轉染到任何哺乳動物細胞中，廣泛應用于將 DNA 和 siRNA 轉染到真核細胞系以及各種原代細胞的實驗中。此外，該轉染試劑在轉染細胞后，可在 10 小時內實現(xiàn)快速代謝，是第三代的新型轉染試劑，為科研實驗帶來了極大的便利和優(yōu)勢。

二、產品說明

1. 產品名稱：Advanced DNA RNA Transfection      Reagent

2. 包裝規(guī)格

• 貨號：AD600025、AD600050、AD600075、AD600150

• 規(guī)格：0.25ml、0.5ml、0.75ml、1.5ml

3. 儲存條件：常溫運輸，需在 4℃環(huán)境下保存，在該條件下可保存兩年之久。嚴禁反復凍融，以免影響試劑的性能和效果。

三、RAW264.7 細胞質粒轉染試劑轉染質粒大小 6000bp 效果圖和轉染操作方法

1. 細胞接種：提前 1 天進行細胞接種，確保在轉染時細胞的匯合度達到 60%-80% 左右，為轉染創(chuàng)造良好的細胞狀態(tài)。

2. 核酸復合物制備：將核酸與轉染試劑按照 1:1 的比例直接混合，使用移液器反復吹吸 10-15 次，使兩者充分混勻，然后在室溫下靜止放置 10-15 分鐘，形成穩(wěn)定的核酸復合物。

3. 加入核酸復合物到細胞培養(yǎng)基：根據參考用量，將制備好的核酸復合物加入到細胞培養(yǎng)基中，并輕輕混勻。值得注意的是，細胞培養(yǎng)基中可以含有血清，這為細胞提供了更接近生理狀態(tài)的環(huán)境。

4. 細胞換液：轉染 24 小時后，對細胞進行正常的換液操作。但對于懸浮細胞而言，在整個轉染過程中無需進行換液，簡化了實驗操作流程。

5. 結果分析

• 對于質粒       DNA 轉染，在轉染 48-72 小時后，通過熒光檢測來評估轉染效率；在 48-96 小時后，檢測 mRNA 或蛋白的表達情況。如果要進行穩(wěn)定表達細胞株的篩選，則在轉染后 24-48 小時左右，加入適量的藥物進行篩選操作。

• 對于       siRNA 轉染，在轉染后 9 小時通過熒光檢測轉染效率，在 48-72 小時檢測 mRNA 或蛋白的表達情況，從而準確評估轉染效果。

四、注意事項

1. 質粒溶解要求：質粒 DNA 必須溶解于無菌雙蒸水或超純水中，絕對不能溶解于提取試劑盒所提供的 Buffer。因為溶解于 Buffer 中的質粒轉染效率會大幅下降，降幅可達 80% 左右，嚴重時甚至會導致轉染wan全失敗。

2. 內毒素去除：質粒必須che底去除內毒素，內毒素對細胞具有很強的毒性，會使轉染效率下降 70%-80% 左右，甚至可能導致轉染失敗。建議使用 Qiagen、TIANGEN、Omega 等品牌的去內毒素質粒提取試劑盒進行處理，以確保質粒的質量。

3. 復合物制備規(guī)范：在復合物的制備過程中，嚴禁使用其他任何試劑對核酸或轉染試劑進行稀釋，只需將核酸和轉染試劑按照 1:1 的比例直接混合即可。如果進行了稀釋操作，將會導致轉染失敗，影響實驗結果。

4. 混勻與孵育：將轉染試劑與核酸充分混勻后，使用移液器吹打 10-15 次，然后在室溫下孵育 10-15 分鐘，之后便可將其加入細胞培養(yǎng)板中。

5. 換液時間：轉染 24 小時后才能進行正常的換液操作，與 Lipo2000 不同，不能在轉染 4-6 小時后就進行換液，否則會影響轉染效果。

6. 培養(yǎng)基要求：在對原代細胞、免疫細胞進行轉染時，細胞基礎培養(yǎng)基中不能含有雙抗培養(yǎng)基，以免對細胞產生不良影響，干擾轉染過程。