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C6+luc 大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記細(xì)胞培養(yǎng)手冊

來源:蘇州千舍生物科技有限公司   2025年03月13日 16:50  

細(xì)胞名稱:C6+luc 大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記

貨號:WS-0088(STR(C6鑒定))

規(guī)格:1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶

細(xì)胞介紹

膠質(zhì)細(xì)胞株C6是由Benda等用N-nitrosomethylurea誘導(dǎo)的大鼠膠質(zhì)瘤克隆,并經(jīng)過一系列的體外培養(yǎng)和動物傳代交替后建成的。當(dāng)細(xì)胞從低密度生長到滿瓶時,S-100產(chǎn)量增加10倍。

該細(xì)胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶Luc基因。

一、細(xì)胞特性

1) 來源:大鼠,膠質(zhì)瘤

2)形態(tài):成纖維樣 貼壁生長

3) 含量:>1x10^6  細(xì)胞數(shù)

4) 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途:僅供科研使用。 

二、細(xì)胞篩選

該細(xì)胞為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Luc的細(xì)胞,隨細(xì)胞傳代次數(shù)的增加,其Luc熒光強度會逐漸減弱。若實驗要求需要維持熒光強度,可以加入嘌呤霉素進行再次篩選。        

建議收到細(xì)胞后至少傳3代,凍存留種后再進行篩選。

初次進行細(xì)胞篩選時,建議加入終濃度為1ug/ml嘌呤霉素的培養(yǎng)基維持培養(yǎng),若無細(xì)胞漂浮或者漂浮較少,即可更換為含2ug/ml嘌呤霉素的培養(yǎng)基繼續(xù)篩選,以此類推,至最高藥物濃度為5ug/ml。若篩選過程中,漂浮細(xì)胞大于60%,則停止篩選,換成正常培養(yǎng)基培養(yǎng),至細(xì)胞密度約80%,可繼續(xù)加入同濃度嘌呤霉素進行篩選。當(dāng)加入5ug/ml嘌呤霉素時細(xì)胞正常增殖,可停止篩選,用不含藥培養(yǎng)基正常培養(yǎng)。

、運輸和保存 

干冰運輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞 

1)1mL凍存管包裝干冰運輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。 

2)T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。 

、培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備 

1) 準(zhǔn)備F12K 培養(yǎng)基  81.5 %;優(yōu)質(zhì)胎牛血清2.5 %馬血清(國產(chǎn))15 %;P/S青霉素-鏈霉素1 %                                                            

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注:具體培養(yǎng)方式以隨貨說明書為準(zhǔn)?。。。?/span>

2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。

、傳代方法

收到細(xì)胞后,在倒置鏡下(最好是在4X物鏡)觀察整個細(xì)胞生長情況。

(一)如果細(xì)胞未長滿,用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內(nèi),嚴(yán)格無菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶,吸出培養(yǎng)液,換 10ml新鮮培養(yǎng)液后繼續(xù)培養(yǎng)。

(二)如果細(xì)胞已長滿,即可進行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下:

1. 棄去培養(yǎng)液,用PBS(不含鈣,鎂離子)洗1-2次。

2. 加0.7-1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,用力拍打瓶壁,期間每隔 5-10s放到顯微鏡下觀察,直至50-70%的細(xì)胞脫落后,加入2ml 以上培養(yǎng)基中止消化。

3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出一半,分到新的培養(yǎng)瓶中。如果沒有特別說明,收到細(xì)胞后的第一次傳代一般是一傳二。

注:

1、觀察細(xì)胞最好在低倍鏡(4或5X物鏡)下進行,否則不能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度??醇?xì)胞的形態(tài)請在10X或20X物鏡下。

2、瓶中運輸培養(yǎng)基不能重復(fù)再用,請換用加雙抗的新培養(yǎng)基,細(xì)胞凍存后,培養(yǎng)基中可不加任何抗生素。

3、有些細(xì)胞貼壁不牢,如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有脫落,可離心吹打后接種到新瓶內(nèi)。

4、收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請及時與我們聯(lián)系。


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