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BD CBA流式液相多重蛋白定量技術(shù)

來源:重慶市華雅干細(xì)胞技術(shù)有限公司   2025年03月14日 10:00  

在生物醫(yī)學(xué)研究中,液相蛋白定量檢測(cè)是不·可或·缺的環(huán)節(jié)。然而,傳統(tǒng)檢測(cè)技術(shù)大多只能針對(duì)單一指標(biāo)進(jìn)行分析,若需同時(shí)檢測(cè)多個(gè)指標(biāo),則需大量樣本分批檢測(cè),操作繁瑣且各指標(biāo)間差異較大。對(duì)于樣本量較少或需對(duì)比各指標(biāo)的研究者而言,傳統(tǒng)技術(shù)難以滿足需求。例如,在細(xì)胞培養(yǎng)上清或血清中,細(xì)胞因子含量較低,常低于常規(guī)檢測(cè)方法的下限,使用Western Blot等常規(guī)蛋白檢測(cè)方法難以奏效。為此,BD-Pharmingen公司開發(fā)了一種基于流式細(xì)胞儀的液相蛋白定量技術(shù)——CBA(Cytometric Bead Array,細(xì)胞因子微球檢測(cè)技術(shù)),為這一難題提供了有效解決方案。

CBA技術(shù)原理CBA是一種基于流式細(xì)胞檢測(cè)系統(tǒng)的多重蛋白定量檢測(cè)方法,可同時(shí)對(duì)單個(gè)樣品中的多個(gè)指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)。BD公司借助流式細(xì)胞儀對(duì)熒光信號(hào)具有級(jí)數(shù)放大的特性,將待測(cè)的可溶性因子附著于近似細(xì)胞直徑的微粒上,從而實(shí)現(xiàn)對(duì)樣品中多種可溶性因子的檢測(cè)。其基本原理與ELISA相似,通過微小、分散的顆粒捕獲液體待測(cè)物,并利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)類似“三明治"結(jié)構(gòu)的顆?!郎y(cè)物復(fù)合體所散發(fā)的熒光,進(jìn)而測(cè)定待測(cè)物的數(shù)量。

在CBA檢測(cè)過程中,每個(gè)微球大小一致,帶有特定熒光強(qiáng)度,并包被有特異性捕獲抗體,為待測(cè)物提供類似ELISA孔板的捕獲表面。當(dāng)微球與待測(cè)樣品溶液混合后,微球上的特異性抗體與樣品中的相應(yīng)抗原或蛋白結(jié)合,隨后加入熒光標(biāo)記的檢測(cè)抗體,形成“三明治"夾心復(fù)合物。通過流式細(xì)胞儀,CBA可對(duì)特異性目的蛋白進(jìn)行檢測(cè)。每種微球攜帶不同強(qiáng)度的紅色熒光,通過流式細(xì)胞儀的FL3通道檢測(cè)微球熒光強(qiáng)度差異實(shí)現(xiàn)目的蛋白的定性;檢測(cè)抗體帶有PE熒光素標(biāo)記,在FL2通道檢測(cè),通過檢測(cè)抗體的PE熒光強(qiáng)度實(shí)現(xiàn)目的蛋白的定量。

CBA技術(shù)特點(diǎn)CBA融合了ELISA和細(xì)胞流式技術(shù)的優(yōu)點(diǎn),是一種先進(jìn)的液相蛋白檢測(cè)技術(shù)。與ELISA相比,CBA的捕獲微球呈懸浮態(tài),能更高效地捕獲被分析物;同時(shí),它還具備流式細(xì)胞儀寬范圍熒光檢測(cè)的特點(diǎn),對(duì)樣本需求量少,檢測(cè)快速且準(zhǔn)確。以下是CBA的主要技術(shù)特點(diǎn):

1.多重檢測(cè)能力CBA最多可同時(shí)對(duì)一個(gè)樣本中的75個(gè)目的蛋白進(jìn)行定量,大大提高了檢測(cè)效率,滿足了復(fù)雜樣本分析的需求。

2.樣本需求量少:僅需50μL溶液即可進(jìn)行一次檢測(cè),這對(duì)于樣本量有限的研究具有重要意義,減少了樣本采集的困難和成本。

3.高靈敏度、寬檢測(cè)范圍和良好重復(fù)性:CBA的分析靈敏度高達(dá)2.8pg/mL,檢測(cè)范圍可達(dá)0-5000pg/ml,所有分析只需一組標(biāo)準(zhǔn)曲線。這種技術(shù)通過抗體的熒光強(qiáng)度對(duì)目的蛋白定量,避免了ELISA中酶聯(lián)放大可能產(chǎn)生的假陽性結(jié)果,提高了檢測(cè)的準(zhǔn)確性和可靠性。

4.靈活的檢測(cè)對(duì)象組合:傳統(tǒng)的CBA試劑盒通常包含固定的6個(gè)指標(biāo),形式較為固定。為了滿足不同客戶的實(shí)際需求和研究興趣,BD公司在2005年初推出了CBA Flex Set。這一創(chuàng)新改變了傳統(tǒng)CBA試劑盒的固定形式,使其成為自由組合、靈活搭配的“自助餐"。研究者可以根據(jù)需要組合不同的捕獲微球來檢測(cè)多個(gè)指標(biāo),最多能同時(shí)檢測(cè)75個(gè)指標(biāo)。除了繼承CBA試劑盒的優(yōu)勢(shì)外,CBA Flex Set還配備了獨(dú)立的軟件分析系統(tǒng)(CBA Flex Set Analysis Software),并且可以在BD FACSArray Bioanalyzer上直接使用96孔和384孔板進(jìn)行操作。這種靈活性賦予了研究者更大的選擇空間,進(jìn)一步豐富了CBA產(chǎn)品線,涵蓋了免疫、細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、細(xì)胞凋亡等多個(gè)領(lǐng)域的蛋白定量分析。

5.操作簡(jiǎn)便,省時(shí)省力:CBA技術(shù)采用芯片式集成測(cè)定,所有檢測(cè)只需一組標(biāo)準(zhǔn)曲線即可計(jì)算出每種待測(cè)蛋白的濃度。操作流程簡(jiǎn)單,整個(gè)檢測(cè)過程僅需3.5小時(shí),可對(duì)樣本進(jìn)行實(shí)時(shí)分析,顯著縮短了檢測(cè)時(shí)間,提高了檢測(cè)效率,使研究人員能夠更快速地獲得實(shí)驗(yàn)結(jié)果,加速研究進(jìn)程。

總之,CBA技術(shù)以其多重檢測(cè)能力、低樣本需求、高靈敏度、寬檢測(cè)范圍、良好重復(fù)性、靈活的檢測(cè)對(duì)象組合以及簡(jiǎn)便的操作流程等優(yōu)勢(shì),為液相蛋白定量檢測(cè)領(lǐng)域帶來了革新,為生物醫(yī)學(xué)研究提供了強(qiáng)大的技術(shù)支持。

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產(chǎn)品應(yīng)用
自CBA上市以來,越來越多的科研和臨床研究人員將CBA應(yīng)用于他們的領(lǐng)域。CBA應(yīng)用領(lǐng)域涉及眼淚、血清、唾液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等樣本中細(xì)胞因子、炎癥因子的水平的分析。CBA還用于細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)中磷酸化蛋白、凋亡相關(guān)蛋白分析,系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)和新生兒膿血癥等免疫疾病的監(jiān)控,腫瘤研究,藥物對(duì)病人的治療效果評(píng)估,藥物研發(fā),疫苗研究,總體免疫功能分析等多領(lǐng)域。

CBA產(chǎn)品信息見下表:

Cat.#產(chǎn)品描述試劑盒檢測(cè)指標(biāo)
557800Non-human Primate Th1/Th2 Cytokine KitIL-2, IL-4, IL-5, IL-6,TNF, IFN-γ
560485Mouse Th1/Th2/Th17 Cytokine KitIL-2, IL-4, IL-6, IFN-γ, TNF, IL-17A, IL-10
551287Mouse Th1/Th2 Cytokine KitIL-2, IL-4, IL-5, IFN-γ,TNF
552364Mouse Inflammation KitIL-6, IL-10, MCP-1, IFN-γ, TNF, IL-12p70
550026Mouse Immunoglobulin Isotyping KitHeavy and light chain isotypes of mouse IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG3, IgA, IgM, and IgE
560484Human Th1/Th2/Th17 KitIL-2, IL-4, IL-6, IL-10, TNF, IFN-γ, IL-17A
550749Human Th1/Th2 Cytokine KitIL-2, IL-4, IL-5, IL-10, TNF, IFN-g
551809Human Th1/Th2 Cytokine Kit IIIL-2, IL-4, IL-6, IL-10, TNF, IFN-g
551811Human Inflammatory Cytokine KitIL-8, IL-1β, IL-6, IL-10, TNF, IL-12p70
552990Human Chemokine KitIL-8, RANTES, MIG, MCP-1, IP-10
561418Human Anaphylatoxin KitC3A,C4A,C
















2 現(xiàn)有CBA Flex Set產(chǎn)品



Phospho Akt1(S473)Phospho Akt2(S474)
Phospho BLNK (Y84)Phospho p120 Catenin(Y228)
Phospho Btk (Y551)Phospho MEK1/2(S222)
Phospho eNOS (S1177)Phospho Paxillin(Y118)
Phospho ERK1/2 (T202/Y204)Phospho Pyk2(Y402)
Phospho Itk (Y511)Phospho SLP-76(Y145)
Phospho JNK1/2 (T183/Y185)Phospho c-jun(S63)
Phospho p38 (T180/Y182)Phospho stat3
Phospho PLC? (Y783)
Phospho Rsk (T573)
Phospho Stat1 (Y701)
Phospho Syk (Y352)
Phospho ZAP70 (Y319)Human Rex-1 Flex Set
Total Stat1Human Oct-4 Flex Set
Total SykHuman Nanog Flex Set
Total ZAP70


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