CY7.5-N3 是一種帶有疊氮基(-N3)的熒光染料,常用于點(diǎn)擊化學(xué)反應(yīng)。在制作過(guò)程中,需注意以下幾點(diǎn):首先,反應(yīng)環(huán)境應(yīng)避免還原劑,因?yàn)榀B氮基易被還原失活。其次,反應(yīng)溫度一般控制在室溫至37°C,避免高溫導(dǎo)致染料分解。此外,反應(yīng)溶液的pH值應(yīng)嚴(yán)格控制在6.5-7.5之間,過(guò)高或過(guò)低的pH值均會(huì)影響疊氮基的活性。在使用時(shí),CY7.5-N3 可通過(guò)與炔基(-C≡C-)修飾的生物分子進(jìn)行點(diǎn)擊化學(xué)反應(yīng)。例如,與蛋白質(zhì)上的炔基側(cè)鏈反應(yīng)。標(biāo)記完成后,需通過(guò)凝膠過(guò)濾或透析等方法去除未反應(yīng)的染料。標(biāo)記后的生物分子可用于熒光成像、流式細(xì)胞術(shù)等檢測(cè),但需注意避光保存,以防止熒光淬滅。
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