α-酮戊二酸是由異檸檬酸的氧化脫羧作用產(chǎn)生的，也是谷氨酸脫氨基作用的酮酸產(chǎn)物。它在三羧酸循環(huán)（TCA循環(huán)）中作為細(xì)胞能量代謝的關(guān)鍵中間體發(fā)揮作用。此外，它還作為一種氮轉(zhuǎn)運(yùn)體，促進(jìn)氨基酸合成，同時(shí)抑制肌肉中的蛋白質(zhì)降解。

Cell Biolabs的α-酮戊二酸（α-KG）檢測(cè)試劑盒提供了一種簡(jiǎn)單便捷的方法，用于在96孔板格式中測(cè)量α-KG。α-KG通過轉(zhuǎn)氨基作用生成丙酮酸，隨后通過比色法或熒光探針進(jìn)行檢測(cè)。每個(gè)試劑盒提供了足夠的試劑，用于100次檢測(cè)，包括空白、標(biāo)準(zhǔn)品和未知樣本。

艾美捷α-酮戊二酸測(cè)定試劑盒(比色法)（#MET-5131）通過偶聯(lián)酶促反應(yīng)來測(cè)量α-KG。α-KG通過轉(zhuǎn)氨基作用生成丙酮酸，隨后通過比色探針進(jìn)行檢測(cè)。樣本和標(biāo)準(zhǔn)品孵育60-180分鐘后，使用標(biāo)準(zhǔn)的96孔分光光度計(jì)平板讀數(shù)器（540-570 nm）進(jìn)行讀取。樣本與96孔微量滴定板格式中的已知濃度α-KG標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行比較。

α-酮戊二酸測(cè)定試劑盒(比色法)組分（在藍(lán)色冰袋上運(yùn)輸）：

1. α-KG反應(yīng)轉(zhuǎn)換劑（部件編號(hào)51311C）：1支750 µL試管

2. α-KG底物混合液（部件編號(hào)51322B）：1支750 µL試管

3. α-酮戊二酸標(biāo)準(zhǔn)品（部件編號(hào)51321C）：1支100 µL試管，100 mM溶液

4. α-KG酶混合液（部件編號(hào)51312C）：1支150 µL試管

5. 比色探針（部件編號(hào)51253C）：1支150 µL棕色試管

6. 過氧化氫酶（HRP，部件編號(hào)234402）：1支100 µL試管，100 U/mL甘油溶液

7. 10X檢測(cè)緩沖液（部件編號(hào)50292A）：1瓶25 mL

儲(chǔ)存：

收到后，將α-KG底物混合液和10X檢測(cè)緩沖液儲(chǔ)存于4°C。其余組分儲(chǔ)存于-20°C。

結(jié)果示例：

以下圖表展示了典型的α-酮戊二酸檢測(cè)試劑盒結(jié)果。以下數(shù)據(jù)僅供參考，不應(yīng)用于解釋或計(jì)算實(shí)際樣本結(jié)果。

圖上：α-酮戊二酸標(biāo)準(zhǔn)曲線示例。

圖下：肝臟勻漿。將雞肝在冷1X檢測(cè)緩沖液中勻漿和超聲處理。離心后，根據(jù)檢測(cè)協(xié)議對(duì)勻漿液進(jìn)行檢測(cè)。

α-酮戊二酸測(cè)定試劑盒(比色法)引用文獻(xiàn)：

Cappello, A. et al. (2022). Extracellular serine empowers epidermal proliferation and psoriasis-like symptoms. Sci Adv. 8(50):eabm7902. doi: 10.1126/sciadv.abm7902 (#MET-5131).