小鼠腸道灌洗液抗體檢測(cè)試劑盒

背景簡(jiǎn)介：

腸道屏障通過防止細(xì)菌過度吸收，在維持腸道穩(wěn)態(tài)中起著重要作用。分泌型IgA、IgG和IgM等免疫球蛋白參與這種保護(hù)機(jī)制。Chondrex公司推出了小鼠腸道灌洗液制備的標(biāo)準(zhǔn)方案，以及可同時(shí)檢測(cè)總免疫球蛋白水平和抗原特異性抗體水平的ELISA試劑盒。由于抗抗原抗體水平可反映腸道免疫功能狀態(tài)，例如：通過口服卵清蛋白（OVA）聯(lián)合霍亂毒素佐劑免疫，能增強(qiáng)腸道內(nèi)抗OVA的IgA抗體。這種免疫反應(yīng)可通過檢測(cè)抗OVA IgA抗體水平并與總IgA水平進(jìn)行比較來(lái)評(píng)估。

產(chǎn)品應(yīng)用：

1）  腸道免疫功能狀態(tài)評(píng)估

2）  過敏原特異性抗體檢測(cè)

3）  腸道相關(guān)特異性抗體檢測(cè)

小鼠腸道灌洗液制備流程（抗體分析用）

基于Lycke等發(fā)表的文獻(xiàn)方法改進(jìn)的小鼠腸道灌洗制備流程如下（抗體分析用）：

1. 取出小鼠小腸組織，用剪刀夾鉗夾住腸道一端。

2. 使用聚四氟乙烯（PTFE）導(dǎo)管注射器（避免刺穿腸道），向腸腔緩慢注入3 ml蛋白酶抑制劑溶液（含0.1 mg/ml胰蛋白酶抑制劑、50 mM EDTA、1 mM PMSF的PBS緩沖液）

3. 夾閉腸道另一端，室溫孵育10分鐘

4. 收集腸道內(nèi)容物至試管，依次進(jìn)行劇烈渦旋震蕩和超聲破碎處理

5. 4℃條件下1800 rpm離心10分鐘

6. 取上清液轉(zhuǎn)移至新管，按1 ml灌洗液添加10 μl 5%nana3的比例混合。

7. 室溫孵育15分鐘

8. 按1 ml灌洗液添加50 μl正常山羊血清的比例混合。該混合液可按照1:1比例

   用ELISA試劑盒配套樣品稀釋緩沖液稀釋后進(jìn)行ELISA檢測(cè)

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參考文獻(xiàn)：

1. Tana, S. Watarai, E. Isogai, and K. Oguma. Induction of intestinal IgA and IgG antibodies preventing adhesion of verotoxin producing Escherichia coli to Caco-2 cells by oral immunization with liposomes. Lett Appl Microbiol 36, 135-139 (2003).

2. M. C. Thurnheer, A. Zuercher, J. Cebra, and N. Bos. B1 cells contribute to serum IgM, but not to intestinal IgA, production in gnotobiotic Ig allotype chimeric mice. J Immunol 170, 4564-4571 (2003).

3. S. Senda, E. Cheng, and H Kawanishi. IgG in murine intestinal secretions. Aging effect and possible physiological role. Scand J Immunol 29, 41-47 (1989).

4. N. Lycke, L. Erlandsson, L. Ekman, K. Schon, and T. Leanderson. Lack of J chain inhibits the transport of gut IgA and abrogates the development of intestinal antitoxic protection. J Immunol 163, 913-919 (1999).

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