標題:化學轉染分類及介紹
一、轉染
轉染(transfection)是細胞在一定條件下主動或被動導入外源DNA片段而獲得新的表型的過程。
二、化學轉染
1.陽離子脂質體
【原理】帶正電荷的脂質體(由磷脂、膽固醇等組成的具有脂質雙分子層結構)依靠靜電作用與DNA形成DNA-脂質體復合物,通過細胞的內吞作用進入細胞.
【優(yōu)點】操作簡便
適合轉染各種細胞
對DNA濃度有一定要求
重復性好,但轉染時需除血清
【缺點】需進行條件優(yōu)化(一些細胞對陽離子脂質體較敏感)
有些細胞系不容易轉染
血清的存在干擾復合物的形成,導致低轉染效率
2.陽離子聚合物(如聚乙烯亞胺(PEI))
【原理】帶正電的聚合物與DNA形成帶正電的復合物后與細胞表面帶負電的蛋白多糖相互作用,并通過內吞作用進入細胞
【優(yōu)點】不含疏水部分而wan-quan溶于水
可進行化學修飾
不像脂質體一樣破壞細胞結構
濃縮DNA,將DNA運送到細胞內,并其在細胞核內釋放
細胞毒性很低,高效
不被血清清除
【缺點】不能生物降解(樹枝狀大分子)
只限于瞬時轉染
3.磷酸鈣法
【原理】磷酸鈣能夠促進外源DNA和細胞的結合,磷酸鈣-DNA復合物能夠附著到細胞表面,并通過內吞作用進入細胞
【優(yōu)點】操作簡單
對DNA濃度要求高
【缺點】對pH值敏感,需仔細制備試劑
適用性有局限(不適用于原代細胞和懸浮細胞)
不能采用RPMI培養(yǎng)基(含有高濃度的磷酸鹽)
三、Polyplus轉染試劑
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