產(chǎn)品名稱: AHARIBO PROTEIN System 360 (12 rxns)

品牌: immaginabiotech

規(guī)格：12 rxns

適用物種：真核細(xì)胞系

起始量：10萬(wàn)細(xì)胞

介紹：用于快速分離和分析新合成蛋白質(zhì)。通過(guò)AHARIBO Protein 360技術(shù)，您可在活躍的翻譯過(guò)程中使用疊氮高丙氨酸（AHA）標(biāo)記新生蛋白質(zhì)，并利用磁珠進(jìn)行分離。隨后，只需將樣本寄送至我方實(shí)驗(yàn)室，我們將通過(guò)液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（LC-MS）技術(shù)進(jìn)行鑒定。數(shù)周內(nèi)，您將收到一份綜合報(bào)告，其中包含樣本中檢測(cè)到的所有新合成蛋白質(zhì)的詳細(xì)信息。

操作流程：

1、樣本制備

無(wú)甲硫氨酸培養(yǎng)基培養(yǎng) -> AHA標(biāo)記 -> 細(xì)胞裂解。

2、蛋白質(zhì)下拉實(shí)驗(yàn)

磁珠孵育 ->磁珠洗滌。

3、肽段定量與鑒定

磁珠酶解 ->LC-MS->數(shù)據(jù)分析。

概念驗(yàn)證研究

AHARIBO蛋白360成功分離AHA標(biāo)記肽段

AHA標(biāo)記K562細(xì)胞（AHA+）與未標(biāo)記細(xì)胞（AHA-）的下拉效率對(duì)比

在LC-MS生成的譜圖中，AHA+樣本顯示出顯著的信號(hào)富集，證實(shí)AHARIBO介導(dǎo)的下拉技術(shù)對(duì)AHA標(biāo)記肽段具有高度特異性。

案例研究：

Torin 2治療應(yīng)用

Torin 2作為mTOR通路抑制劑，通過(guò)阻斷mTOR激酶活性調(diào)控蛋白質(zhì)合成。本研究采用AHARIBO蛋白技術(shù)檢測(cè)Torin 2誘導(dǎo)的翻譯抑制效應(yīng)：將K562細(xì)胞分為實(shí)驗(yàn)組（AHA孵育期間添加100 nM Torin 2處理1小時(shí)）與對(duì)照組（僅AHA孵育），經(jīng)肽段下拉技術(shù)富集AHA標(biāo)記的新合成肽段后，通過(guò)LC-MS進(jìn)行定量蛋白質(zhì)組學(xué)分析。

應(yīng)用方向

1.蛋白質(zhì)合成機(jī)制研究

動(dòng)態(tài)追蹤疾病模型（如癌癥、神經(jīng)退行性疾?。┲行律鞍椎臅r(shí)空表達(dá)特征。

驗(yàn)證mRNA翻譯效率差異，解析非編碼RNA對(duì)蛋白質(zhì)合成的調(diào)控作用。

2.藥物靶點(diǎn)發(fā)現(xiàn)與驗(yàn)證

篩選小分子化合物對(duì)特定通路蛋白合成的抑制/激活效應(yīng)（如抗癌藥物對(duì)癌基因產(chǎn)物合成的阻斷）。

監(jiān)測(cè)抗體藥物誘導(dǎo)的B細(xì)胞受體（BCR）信號(hào)通路相關(guān)蛋白的快速合成。

3.翻譯后修飾（PTM）分析

結(jié)合磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)，研究激酶活性與新生蛋白磷酸化的協(xié)同調(diào)控。

探索新生蛋白的糖基化修飾模式對(duì)免疫原性的影響（如疫苗研發(fā)）。

4.病毒學(xué)與感染機(jī)制

定量宿主細(xì)胞在病毒感染后的抗病毒蛋白（如干擾素誘導(dǎo)蛋白）合成動(dòng)力學(xué)。

鑒定病毒劫持宿主翻譯機(jī)器的關(guān)鍵宿主因子（如新冠病毒的ORF1ab蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)）。

5.合成生物學(xué)與蛋白質(zhì)工程

優(yōu)化人工合成基因的翻譯效率，篩選高表達(dá)工程蛋白的宿主細(xì)胞系。

研究稀有密碼子對(duì)新生蛋白折疊速率的影響（如熒光蛋白變體的快速篩選）。

注意事項(xiàng)

1.實(shí)驗(yàn)安全規(guī)范

試劑盒含同位素標(biāo)記成分（如L-賴氨酸-13C?1?N?），需嚴(yán)格遵守放射性/穩(wěn)定性同位素操作規(guī)程，避免交叉污染。

實(shí)驗(yàn)區(qū)域應(yīng)配備通風(fēng)櫥及專用耗材，廢棄物需按生物危害品處理。

2.樣本適用性限制

僅支持真核細(xì)胞系（如HEK293、Jurkat等），不適用于原代細(xì)胞、組織樣本或微生物（除非提前驗(yàn)證）。

細(xì)胞活性需＞80%，避免使用凍存或凋亡細(xì)胞，以免影響標(biāo)記效率。

3.操作關(guān)鍵控制點(diǎn)

嚴(yán)格遵循代謝標(biāo)記時(shí)間窗口（通常為4-6小時(shí)），過(guò)長(zhǎng)可能導(dǎo)致代謝平衡破壞。

磁珠純化步驟需充分震蕩混勻，避免因結(jié)合效率不足導(dǎo)致假陰性結(jié)果。

4.數(shù)據(jù)分析前提條件

需提供細(xì)胞培養(yǎng)基成分說(shuō)明（如是否含血清），避免外源性肽段干擾。

建議同步設(shè)置陰性對(duì)照（未標(biāo)記細(xì)胞）和陽(yáng)性對(duì)照（已知高表達(dá)蛋白），提升數(shù)據(jù)可信度。

5.法規(guī)與兼容性

數(shù)據(jù)僅限科研用途，若涉及臨床樣本需另行倫理審批。

兼容主流質(zhì)譜儀（如Thermo Orbitrap、AB Sciex TripleTOF），但需提前確認(rèn)儀器參數(shù)適配性。

常見(jiàn)問(wèn)題

Q1：系統(tǒng)是否適用于原代細(xì)胞或臨床樣本？

A：當(dāng)前版本主要針對(duì)永生化真核細(xì)胞系（如HEK293、HeLa）優(yōu)化。若需擴(kuò)展至原代細(xì)胞或組織樣本，需提前聯(lián)系技術(shù)團(tuán)隊(duì)評(píng)估可行性。

Q2：LC-MS分析是否需要額外付費(fèi)？

A：12次反應(yīng)套餐已包含基礎(chǔ)LC-MS服務(wù)（含數(shù)據(jù)報(bào)告）。如需高分辨率質(zhì)譜（如Orbitrap）或深度覆蓋分析，可升級(jí)套餐（報(bào)價(jià)詳詢銷售）。

Q3：如何保證實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性？

A：系統(tǒng)內(nèi)置三重質(zhì)控：

同位素標(biāo)記效率驗(yàn)證（CV<5%）；

陽(yáng)性對(duì)照肽段（如β-actin）內(nèi)參校正；

數(shù)據(jù)庫(kù)匹配率閾值設(shè)定（≥95%置信度）。

Q4：是否支持多組學(xué)聯(lián)合分析？

A：可與轉(zhuǎn)錄組、磷酸化蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)整合，提供定制化多組學(xué)分析報(bào)告（需額外付費(fèi)）。

注：該說(shuō)明僅供參考，最終請(qǐng)immaginabiotech品牌說(shuō)明書為準(zhǔn)。

如有任何疑問(wèn)，歡迎聯(lián)系咨詢：“上海起發(fā)”！

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