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戴安高效液相色譜儀（HPLC）作為分析化學領域核心設備，其操作流程的規(guī)范性直接影響實驗結果的準確性。本文基于設備結構特性，結合實驗室實踐，系統(tǒng)梳理其標準化操作流程。
一、開機準備與參數設置：
開機前需檢查環(huán)境條件（溫度10-40℃，濕度10%-85%），確認電源電壓穩(wěn)定。啟動儀器后，通過控制面板設置流動相比例、流速（如0.5-2.0 mL/min）及柱溫（如30-40℃）。例如，分析藥物成分時，采用等度洗脫模式，將甲醇-水（70:30）作為流動相，流速設為1.0 mL/min，可實現(xiàn)有效分離。檢測器參數設置需匹配分析需求，如紫外檢測器需選擇254 nm波長，帶寬設為1 nm。
二、樣品前處理與進樣：
樣品需根據性質選擇前處理方法：固體樣品需用甲醇或乙腈溶解，液體樣品需用0.45 μm濾膜過濾。進樣前需檢查進樣器狀態(tài)，自動進樣器需確認洗針液（50%甲醇）充足，手動進樣則需確保注射器無氣泡。進樣量需控制在色譜柱容量范圍內（如4.6 mm×250 mm色譜柱建議進樣量<20 μL）。例如，在環(huán)境水樣分析中，通過固相萃取富集后，將樣品稀釋至100倍并過濾，確保進樣量精確至10 μL。
三、運行分析與數據處理：
啟動分析后，需等待基線穩(wěn)定（通常需10-30分鐘），期間可進行質控樣測試。數據采集時，需監(jiān)控壓力變化（正常范圍50-400 bar），若壓力異常需立即停機檢查。分析完成后，采用外標法或內標法進行定量，例如通過建立標準曲線（R2>0.995），可實現(xiàn)ng/mL級定量分析。某實驗室在分析食品添加劑時，通過優(yōu)化流動相梯度，將檢測限降低至0.5 ng/mL。
四、關機與維護：
實驗結束后，需用純有機溶劑（如甲醇）沖洗色譜柱30分鐘，再關閉檢測器電源。長期停機時，需用80%甲醇水溶液保存色譜柱，并定期進行系統(tǒng)壓力測試。日常維護包括每周更換清洗液、每月清洗進樣針，以及每季度更換在線過濾器。例如，某實驗室通過嚴格執(zhí)行維護規(guī)程，將色譜柱使用壽命延長至12個月以上。
戴安高效液相色譜的操作需遵循“準備-運行-維護”閉環(huán)管理，通過精細化參數設置和標準化流程控制，可確保實驗數據的可靠性和儀器運行的穩(wěn)定性，為科研和質量控制提供堅實保障。
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