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色譜柱的清洗和再生方法

來(lái)源:杭州康納科技有限公司   2013年03月06日 12:58  

 

  除非特殊說(shuō)明,在所有情況下,所用溶劑的體積應(yīng)該是色譜柱體積的40-60倍。
  應(yīng)在清洗過(guò)程開(kāi)始和結(jié)束時(shí)各測(cè)一次柱效和容量因子等,比較色譜柱性能的改善,以確定清洗的效果。
  確保色譜柱中沒(méi)有樣品和緩沖溶液,清洗前所用的溶劑應(yīng)與zui初清洗時(shí)所用的溶劑相溶。
  應(yīng)確保實(shí)驗(yàn)測(cè)試時(shí)所用的流動(dòng)相與色譜柱中zui后的溶劑相溶。
1正相填料
  用四氫呋喃沖洗。
  用甲醇沖洗。
  用四氫呋喃沖洗。
  二氯甲烷沖洗。
  用無(wú)苯正己烷沖洗。
2反相填料
  用HPLC級(jí)水沖洗,沖洗時(shí)進(jìn)4等份的200μl的二甲亞砜(DMSO)。
  用甲醇沖洗。
  用氯仿沖洗。
  用甲醇沖洗。
3陰離子交換填料
  用HPLC級(jí)水沖洗。
  用甲醇沖洗。
  用氯仿沖洗。
4 陽(yáng)離子交換填料
  用 HPLC 級(jí)水沖洗;在沖洗的過(guò)程中進(jìn)4 等份200μl 的DMSO
  四氫呋喃沖洗。
5 蛋白質(zhì)凝膠過(guò)濾填料
  去除蛋白質(zhì)尺寸排阻介質(zhì)中的污染物有兩種清洗/再生的方法。
  弱保留蛋白質(zhì)
  用30moL/L pH3.0 磷酸鹽緩沖液沖洗。
  強(qiáng)保留蛋白質(zhì)
  用100%的水到100%的乙腈梯度洗脫60min。
6多孔石墨化碳
  多孔石墨碳有四種再生的方法,選用哪一種方法依賴于被分析物和所用的溶劑。
  酸堿再生
  適合于使用極性流動(dòng)相分析離子類(lèi)分析物。
  將色譜柱倒裝
  用50ml含0.1%三F乙酸的四氫呋喃/水(1:1)溶液1ml/min流速?zèng)_冼。
  用50ml含0.1%三乙胺或氫氧化鈉的四氫呋喃/水(1:1)溶液1ml/min流速?zèng)_冼。
  用50ml含0.1%三F乙酸的四氫呋喃/水(1:1)溶液1ml/min流速?zèng)_冼。
  用95%甲醇水溶液沖洗重新平衡。
  將色譜柱改為正向。
        作者:英國(guó)的R.Plumb-Glaxo
  強(qiáng)有機(jī)溶劑再生
  適合于水相分析極性或離子類(lèi)分析物。
  用50ml丙酮以1ml/min流速?zèng)_洗。
  用120ml二丁醚以1ml/min流速?zèng)_洗。
  用50ml丙酮以1ml/min流速?zèng)_洗。
  用水沖冼至平衡。
  正相再生
  適合于主要使用正相流動(dòng)相的多孔石墨化碳柱。
  用50ml二氯甲烷以1ml/min流速?zèng)_洗。
  用50ml甲醇以1ml/min流速?zèng)_洗。
  用50ml水以1ml/min流速?zèng)_洗。
  用50ml 0.1mol/L鹽酸以1ml/min流速?zèng)_洗。
  用50ml水以流速1ml/min沖洗。
  用50ml甲醇以1ml/min流速?zèng)_洗。
  用50ml二氯甲烷以1ml/min流速?zèng)_洗。
  用流動(dòng)相沖冼至平衡。
       作者:瑞典的A.Karlsson-Uppsala
  三F乙酸的去除
  適合于流動(dòng)相中含有三F乙酸的多孔石墨化碳柱。
  用加熱到75℃的乙腈沖洗,同時(shí)色譜柱也要保持在這一溫度。
7 帶金屬抗衡離子的聚合物填料
  基質(zhì)是帶金屬抗衡離子的聚合物色譜柱,有三種再生方法,每種方法詳細(xì)列于下表:
 

色譜柱類(lèi)型
金屬污染物
有機(jī)污染物
色譜柱清冼
氫離子型
用25℃的0.1mol/L的H2SO4溶液以0.1ml/min的流速反向沖冼4—16小時(shí)
用25℃的20:80的乙腈水溶液以0.1ml/min的流速反向沖冼4小時(shí)
用65℃的20:80的ACN:0.01NH2SO4溶液以0.1ml/min的流速反向沖冼4小時(shí)
鈣離子型
用25℃的0.1mol/L pH6.3的Ca(NO3)2溶液以0.1ml/min的流速反向沖冼4—16小時(shí)
用25℃的20:80的乙腈水溶液以0.1ml/min的流速反向沖冼4小時(shí)
用25℃的20:80的乙腈水溶液以0.1ml/min的流速反向沖冼4小時(shí)
鈉離子型
用85℃的0.1mol/L 的NaNO3溶液以0.1ml/min的流速反向沖冼4—16小時(shí)
用25℃的20:80的乙腈水溶液以0.1ml/min的流速反相沖冼4小時(shí)
用25℃的20:80的乙腈水溶液以0.1ml/min的流速反向沖冼4小時(shí)
銀離子型
沒(méi)有再生過(guò)程的報(bào)導(dǎo)。
用25℃的20:80的乙腈水溶液以0.1ml/min的流速反向沖冼4小時(shí)
用25℃的20:80的乙腈水溶液以0.1ml/min的流速反向沖冼4小時(shí)
鉛離子型
用85℃的pH 5.3的0.1M Pb(NO3)2溶液以0.1ml/min的流速反向沖冼4—16小時(shí)
用25℃的20:80的乙腈水溶液以0.1ml/min的流速反向沖冼4小時(shí)
用25℃的20:80的乙腈水溶液以0.1ml/min的流速反向沖冼4

 

 

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