固定液選擇的標準:
(1)好地保持細胞和組織的形態(tài)結構;
(2)大限度地保存抗原的免疫活性。一些含重金屬的固定液在免疫組化和細胞化學技術中是禁用的;
(3)不要用可能帶有自發(fā)熒光的固定劑,如帶有苦味酸的固定劑,還有甲醛升汞固定液,會使上皮細胞產生非特異性熒光;
(4)固定劑的選擇、固定時間、溫度和PH值都會影響實驗結果。
常用的幾種固定液:
(1)4%中性甲醛固定液:能滿足常規(guī)HE及免疫組化、PCR等工作(Job)。中性甲醛是以PH7.2-7.4的磷酸緩沖液為溶劑配制的,其固定效果及對組織抗原性的保存均優(yōu)于一般的4%甲醛固定液。此固定液配制后應密封并保存在陰涼處,保存時間不超過一個月。
甲醛(40%) 100ml
無水磷酸氫二鈉 6.5g
磷酸二氫鈉 4.0g
蒸餾水 900ml
(2)乙醇固定液:使用時以80%-95%的濃度為宜,具有硬化、固定、脫水等作用,對組織滲透力較弱,因此很少單獨使用,但其保存組織中的核酸強于中性甲醛,故常用于有核酸操作的實驗或檢查,假如用于證實尿酸結晶和保存糖原,可用于100%乙醇固定組織。
(3)4%多聚甲醛固定液:主要用于培養(yǎng)細胞的固定。
混合固定液
(1)乙醇-甲醛(乙醇-福爾馬林,AF)固定液:適用于皮下組織中肥大細胞的固定。該固定液有固定兼脫水作用,固定后的標本可直接入95%乙醇脫水。
甲醛(40%) 100ml
95%乙醇 900ml
(2)B5(醋酸鈉-升汞-甲醛)固定液:多用于固定淋巴組織。染色前應進行脫汞沉淀處理。
無水醋酸鈉 1.25g
升汞 6.0g
蒸餾水 90ml
使用前加入甲醛 10ml
(3)Bouin固定液:非凡適用于睪丸活檢組織的固定。Bouin液對組織固定較均勻,收縮很少,不會使組織變硬變脆。需現配現用。
飽和苦味酸水溶液(約1.22%) 75ml
甲醛 25ml
冰醋酸 5ml
(4)Carnoy固定液:穿透能力強,可很好的固定細胞質和細胞核,非凡適用于固定外膜致密的組織,也適用于糖原及尼氏小體的固定。
(5) Zenker固定液:經此液固定的標本,細胞核和細胞質染色頗為清楚,但成本較高且需非凡處理汞。該固定液要避免接觸陽光,以免引起化學變化而失效。
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