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細(xì)胞學(xué)技術(shù)的一般環(huán)節(jié)

來(lái)源:上海富眾生物科技發(fā)展有限公司   2010年04月26日 08:13  

一、紡錘體阻斷劑(Spindle inhibitor)
在有絲分裂過(guò)程中,隨著紡錘絲的形成,染色體被牽引到一起難以觀察其形態(tài)。紡錘體的形成在于細(xì)胞質(zhì)和紡錘體成分的粘度之間的平衡,因
此,改變細(xì)胞質(zhì)的粘度,即可破壞紡錘體形成,從而使得染色體均勻散開,且染色體縊痕區(qū)更為清楚。
在培養(yǎng)中使用的紡錘體阻斷劑為秋水仙素,在終止培養(yǎng)前加入適量秋水仙素,使正在分裂的細(xì)胞停留在中期,以獲得大量分裂相供分析之用。秋
水仙素的濃度范圍比較寬,一般使用濃度0.05—0.8微克/毫升,在終止培養(yǎng)前處理2—4小時(shí)。但在實(shí)際工作中需要借助濃度和處理時(shí)間來(lái)控制染色
體的收縮程度。秋水仙素作用時(shí)間越長(zhǎng),被阻斷的中期分裂相越多,但是染色體也越凝聚和收縮,所以還視各實(shí)驗(yàn)室經(jīng)驗(yàn)而定。
二、低滲液(hypotonic solution)
低滲液是指滲透壓和離子強(qiáng)度均低于正常細(xì)胞生理?xiàng)l件的溶液,例如水、低滲的檸檬酸鈉或氯化鈉、甘油磷酸鉀(0.65M)、氯化鉀(0.075M)
等。低滲效果取決于低滲液的化學(xué)組成、低滲的溫度和處理時(shí)間。低滲處理是憑借反滲透作用使細(xì)胞膨脹染色體鋪展,同時(shí)可使粘附于染色體的核
仁物質(zhì)散開,以便能在一個(gè)平面上觀察所有染色體形態(tài)。
實(shí)驗(yàn)室中一般選用0.075M KCl為低滲液(具體情況取決于實(shí)際操作,鑒于實(shí)驗(yàn)的連續(xù)性和穩(wěn)定性,本實(shí)驗(yàn)室采用0.35%KCl),其優(yōu)點(diǎn)有:①染
色體輪廓清楚,可染色性強(qiáng),染色時(shí)間短,②用于顯帶染色時(shí)能充分顯示帶型特點(diǎn)。
低滲處理為37℃,15-25分鐘,以預(yù)實(shí)驗(yàn)條件為準(zhǔn)。
三、固定液
固定液的重要特性是能迅速穿透細(xì)胞,將其固定并維持染色體結(jié)構(gòu)的完整性,還要能夠增強(qiáng)染色體的嗜堿性,達(dá)到優(yōu)良染色效果。
單純的固定液一般難以達(dá)到這些要求,因此在實(shí)驗(yàn)中使用兩種混和的固定液。由于Carnoy首先使用的甲醇和冰乙酸混合液而稱的卡諾氏固定液是
效果良好的固定液。Carnoy固定液(甲醇:冰乙酸=3:l)每次使用前需臨時(shí)配制,長(zhǎng)時(shí)間放置影響固定效果,固定時(shí)間15分鐘至24小時(shí),冰箱、室
溫均可。必要時(shí)可改變甲醇和冰乙酸的比例,冰乙酸比例增加,利于細(xì)胞膨脹、染色體鋪展,但易導(dǎo)致細(xì)胞破裂、染色體散失。
四、滴片
滴片使細(xì)胞懸液從一定高處落在載玻片上,淋巴母細(xì)胞膜破裂,染色體分散開。載玻片可用冰片和干片,效果均好。滴片后需空氣干燥。
五、Giemsa染色
Giemsa染料不是一種單一染料,而是天青、伊紅、甘油和甲醇的混合物,配制后原液儲(chǔ)存。在常規(guī)染色中,并不比其他染料*,但在顯帶技術(shù)
中,卻是*的。
Giemsa工作液在使用前臨時(shí)配制,濃度可在2.5-10%之間(原液2份加pH7.4磷酸緩沖液10-40份)。染色后,染色質(zhì)呈紅色,細(xì)胞核是藍(lán)色。

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