了解酸性蛋白酶的活力測(cè)定方法，來(lái)滬鼎，搶先看！今天就是新年中的第二節(jié)氣雨水了，有的地方竟還是大雪紛揚(yáng)的狀態(tài)中，上海已經(jīng)有春天的跡象了。旁余之話我們不多說(shuō)，下面就直接進(jìn)入主題，春來(lái)雨問(wèn)：以何方法來(lái)做酸性蛋白酶的活力測(cè)定？
    我們今天選擇的方法叫做福林法，您是不是想要問(wèn)為什么呢？上海滬鼎就來(lái)回答您這個(gè)問(wèn)題，這時(shí)因?yàn)楦Ａ衷噭┰趬A性條件下可被酚類化合物還原呈藍(lán)色反應(yīng)，由于蛋白質(zhì)分子中有含酚基的氨基酸，它使蛋白質(zhì)及其水解產(chǎn)物呈上述反應(yīng)，利用這個(gè)方法原理可以測(cè)定蛋白酶活力的強(qiáng)弱。
    當(dāng)我們?cè)谶x擇方法的時(shí)候要為實(shí)驗(yàn)做一個(gè)分析，由各種條件來(lái)做設(shè)想，zui后選擇一個(gè)合適的方法來(lái)做實(shí)驗(yàn)。由此方法設(shè)想，我們來(lái)看看，它需要用到的試劑。
    l、福林試劑
    2、0.4mol/l的TCA溶液
    3、0.8mol/l的碳酸鈉溶液
    4、pH值為3.6的醋酸緩沖液
    5、2%酪蛋白溶液
    6、100μg/ml酪氨酸溶液
    再下一步的工作就是來(lái)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，每一個(gè)朋友都要學(xué)會(huì)去分析，還有每一步需要做哪些步驟。我們所配制濃度分別為(單位：μg/ml)：0、20、40、60、80、100的酪氨酸溶液，各取lml(做4個(gè)平行樣)，加入不同的試管中，再各加入已稀釋的福林試劑lml和0.4mol/l的碳酸鈉5ml，搖勻，置于水浴鍋中，40℃保溫發(fā)色20min。然后在721型分光光度計(jì)上進(jìn)行比色測(cè)定(波長(zhǎng)660nm，以濃度為0μg/ml的酪氨酸反應(yīng)液做空白對(duì)照)。
    實(shí)驗(yàn)到這里算是完成了一半了，上海滬鼎在這里小小的說(shuō)明一下哦！我公司酸性蛋白酶CAS號(hào)為9025-49-4，這里就是要跟您說(shuō)近些天購(gòu)買是有*活動(dòng)的，一個(gè)方面是元宵節(jié)的*還沒(méi)結(jié)束，還有就是二月至三月的春季*，這個(gè)時(shí)候購(gòu)買可以享受7.8折優(yōu)惠，另外還送小禮物哦！好啦，下面就該到操作步驟的環(huán)節(jié)啦。
    活力測(cè)定操作步驟：稱取酶粉5g，充分碾細(xì)，加蒸餾水1000ml，在 4O℃水中攪拌3Omin，充分溶出酶蛋白，然后過(guò)濾，濾液用0.1mol/lpH值為3.6的醋酸緩沖液稀釋到一定倍數(shù)。取稀釋液1ml(做平行樣4個(gè))，40℃水浴預(yù)熱2min，再各加入經(jīng)同樣預(yù)熱的酪蛋白1ml，保溫10min。然后立即加入 0.4mol/l三氯醋酸2ml，終止反應(yīng)。繼續(xù)置水浴中保溫20min，使殘余蛋白質(zhì)沉淀，然后離心分離或過(guò)濾。取濾液lml，再加入0.8mol/l碳酸鈉溶液5ml和已稀釋的福林試劑1ml，搖勻保溫發(fā)色20min后，進(jìn)行比色測(cè)定。對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算酪氨酸的釋放量。
    zui后的一個(gè)方面就是計(jì)算，基本上來(lái)說(shuō)，我們所做的實(shí)驗(yàn)組成都是差不多的，都有原理技術(shù)等等之類的，要怎樣去計(jì)算呢？
    我們以酪蛋白為作用底物，在一定pH值和溫度下，同酶液反應(yīng)，經(jīng)一段時(shí)間后加入三氯醋酸，終止酶的反應(yīng)，并使殘余的酪蛋白質(zhì)沉淀，同水解產(chǎn)物分開(kāi)。經(jīng)過(guò)濾后取過(guò)濾液(含蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物的三氯醋酸溶液)，用Na2C03堿化，再加入福林試劑使之發(fā)色。藍(lán)色反應(yīng)的強(qiáng)弱與過(guò)濾波中蛋白水解產(chǎn)物的量成正比例，而水解產(chǎn)物的量又同酶活力成正比。因此，根據(jù)藍(lán)色反應(yīng)的強(qiáng)弱可以計(jì)算出蛋白酶的活力。
蛋白酶活力=A×4×N/10
式中：A——對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線得出的酪氨酸釋放量 
4--4ml反應(yīng)液取出1ml 
N--酶粉的稀釋倍數(shù) 
10——反應(yīng)時(shí)間10min 
    本文到這里已經(jīng)為您說(shuō)明完了用什么方法來(lái)做酸性蛋白酶的活力測(cè)定，以及其方法原因。了解我公司的產(chǎn)品價(jià)格以及其他信息都咨詢我公司哦！滬鼎生物的鈴聲期待因您撥而響起。