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流式細(xì)胞術(shù)測(cè)效靶細(xì)胞殺傷實(shí)驗(yàn)

來源:上海富眾生物科技發(fā)展有限公司   2010年06月07日 09:10  

做免疫學(xué)特別是腫瘤學(xué)實(shí)驗(yàn),總免不了要測(cè)淋巴細(xì)胞或其他細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷,老外zui常用的是Cr51放射實(shí)驗(yàn),但這個(gè)方法在國(guó)內(nèi)的不少地方都不能做,而MTT這個(gè)方法又太老了,而且也不準(zhǔn)確,那么替代方法就用流式細(xì)胞術(shù),又方便,又準(zhǔn)確,這也是偶參照老外的方法吧。

1 計(jì)數(shù)靶細(xì)胞,并加入CFSE,使CFSE終濃度達(dá)到2uM,37度30分鐘。
2 拿出后,1000rpm,5min,可隱約看到細(xì)胞染成黃色,PBS洗三次
3 與效應(yīng)細(xì)胞混培,作用4-6小時(shí)。
4 將細(xì)胞混合液消化取出,洗二次,PI工作液5ul,避光30分鐘后上流式
5 CFSE,PI雙陽(yáng)性的細(xì)胞為被殺傷的靶細(xì)胞,除以靶細(xì)胞總數(shù),即為殺傷率。

注意事項(xiàng):
1。CFSE及PI的濃度必須注意,寧低勿高,個(gè)人感覺,如果標(biāo)高的話,在4度放一晚好像會(huì)好一些
2。必須設(shè)全陰,CFSE單標(biāo),PI單標(biāo),CFSE+PI雙標(biāo)并同步化的靶細(xì)胞的參照.
3。作用時(shí)間不能太長(zhǎng),不要超過8個(gè)小時(shí)。

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