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ELISA檢測試劑盒原理
    應用雙抗體夾心法測定標本中待測物質水平。用純化的待測物質抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入待測物質，再與HRP標記的待測物質抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測物質呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，通過標準曲線計算樣品中待測物質濃度。
    不同廠家的試劑盒的檢測范圍并不相同，一般說來，診斷試劑的檢測范圍以ng/ml計。而常見的科研試劑盒中的樣本中的目標蛋白，范圍可隨樣本的類型而變化。所以實驗前應通過文獻和預實驗的方法確定樣本是否在所購試劑盒的范圍內，如果不在檢測范圍內，分兩種情況對待。
 1. 如果樣本中目標蛋白太低，需找相應靈敏度更高的試劑盒來檢測或濃縮樣本；
 2. 如果樣本中目標蛋白太高，則需要進一步稀釋后進行檢測。
    
   1971年Engvall和Perlmann發(fā)表了酶聯免疫吸附劑測定用于IgG定量測定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標抗體技術發(fā)展成液體標本中微量物質的測定方法。
    組織勻漿液的樣本，要制備過程中需要在緩沖液中加入蛋白酶抑制劑，防止蛋白成份被內源性蛋白酶降解，造成檢測結果的值偏低。因組織勻漿液的樣本蛋白種類多，含量豐富，實驗參照血清血漿標本的處理方法進行，否則就會影響實驗結果。具體是加入50 ul樣本分析緩沖液后加50 ul標本，需稀釋時，請將樣本與樣本分析緩沖液等量加入，不足部分用標準品稀釋液補充至100ul。
    因為目標蛋白不同，可能造成降解的蛋白類型可能不一樣，如果實驗前通過文獻確定用哪種蛋白酶抑制劑，有針對性加入，可節(jié)省抑制劑。如果查不到相關文獻，可采用組合抑制的辦法確保蛋白不易被降解。