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利用陰離子色譜-安培檢測法進(jìn)行燕窩中糖的概況分析

來源:深圳瑞盛科技有限公司   2014年10月31日 08:53  

引言
燕窩為雨燕科(Apodidae)金絲燕屬(Collocalia)
的多種鳥類分泌出的唾液與其絨羽混合凝結(jié)于懸崖峭壁上
而筑成的巢窩。燕窩是一種名貴的滋補(bǔ)佳品和宴席佳
肴,富含人體必須的氨基酸、多糖類及蛋白質(zhì),藥食皆
宜,深受國內(nèi)外消費(fèi)者的喜愛?,F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn),燕窩具有
多種藥理功效,主要有抗病毒、提高免疫力和強(qiáng)健骨骼、
緊致皮膚等功效。
由于燕窩資源、營養(yǎng)豐富、價(jià)格昂貴,且缺少國
家標(biāo)準(zhǔn)或行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)對燕窩偽劣真假進(jìn)行鑒別,市場上存在
大量品質(zhì)低劣及假冒燕窩產(chǎn)品。針對燕窩及燕窩飲品的質(zhì)
量及等級問題,有學(xué)者通過紫外分光光度法、液相色
譜法對燕窩中的唾液酸成分進(jìn)行分析,但可通過加入工業(yè)
唾液酸等方法進(jìn)行摻假;也有學(xué)者用氣相色譜法測定燕窩
中4-5種醛糖的含量,根據(jù)其*的峰比例,構(gòu)成易于識
別的燕窩“指紋”圖進(jìn)行燕窩樣品的鑒定及分析。也有通
過氨基酸分析法測定燕窩中各種氨基酸的構(gòu)成比例來分析
燕窩真假。

本文通過陰離子色譜-脈沖安培檢測法測定燕窩
水解液中糖的組成,分析糖組成中各種糖及唾液酸的相
對比例來鑒別燕窩真假,方法無需衍生、簡單可行,結(jié)
果可靠。
測試條件
儀器:ICS-5000離子色譜儀(ThermoFisher公司);
分析柱:CarbonPac  PA1, 250×4 mm,分析柱
(P/N:035391);
CarbonPac, PA1, 50×4 mm, (P/N:043096);
柱溫:30 ℃;
淋洗液:中性及氨基糖

唾液酸 : 0-26 min, 100 mmol/L 氫氧化鈉 +50 mmol/L 
醋酸鈉
流速:1.0 mL/min;
定量環(huán):10 µL;
檢測方式:電化學(xué)檢測,金電極,標(biāo)準(zhǔn)糖電位。
AS-DV自動進(jìn)樣器

樣品前處理
中性及氨基糖:稱取50 mg的燕窩粉末樣品加入到特
富龍的螺紋管中,加入2 mL4N三氟*乙* |。密封好特富龍
管,在115 ℃下水解3 h。水解完成后冷卻到室溫,將水
解管中的的混合物在減壓條件下旋干,將殘留物用高純
水定容至1000 mL。
唾液酸:稱取50 mg的燕窩粉末樣品加入到特富龍的
螺紋管中,加入2 mL0.1N三氟*乙* |。密封好特富龍管,
在80 ℃下水解1 h。水解完成后冷卻到室溫,將水解管中
的的混合物在減壓條件下旋干,將殘留物用高純水定容
至1000 mL。

結(jié)果和討論
色譜條件優(yōu)化
糖類化合物具有弱酸性及親水性,在比較強(qiáng)的堿性
溶液中以陰離子形態(tài)存在。在強(qiáng)堿性條件下,糖結(jié)構(gòu)中
的羥基等點(diǎn)化學(xué)活性基團(tuán)在適當(dāng)?shù)碾娢幌驴梢栽诮痣姌O
表面被氧化從而導(dǎo)致電流變化,可通過脈沖安培檢測器
進(jìn)行檢測。使用CarbonPac PA1柱能在合適的淋洗液條
件下將幾種糖依次洗脫。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)當(dāng)氫氧化鈉濃度低于
14 mmol/L 時(shí),葡萄糖胺與半乳糖分離度變差;當(dāng)氫氧化
鈉濃度高于20 mmol/L 時(shí)葡萄糖與甘露糖分離度變差;
綜合考慮,選擇16 mmol/L氫氧化鈉作為淋洗液,七種糖
所得分離情況如色譜圖1所示。唾液酸的保留較強(qiáng),采用
CarbonPac PA1分離唾液酸需要添加一定量的醋酸鈉增加
洗脫能力,優(yōu)化后,所得結(jié)果如色譜圖2所示。

線性、相關(guān)系數(shù)、檢測限及精密度
將不同濃度的糖及唾液酸標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液稀釋配制得
到一濃度系列,對上述系列濃度依次測定, 取其峰面積
值,以峰面積為縱坐標(biāo),標(biāo)準(zhǔn)液質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)建立
標(biāo)準(zhǔn)工作曲線,得到糖及唾液酸的線性回歸方程和相關(guān)
系數(shù)。取標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)進(jìn)樣5針,得到精密度。結(jié)果如下
表1所示。
實(shí)際樣品分析
取市場上購得的燕窩樣品,照選定的樣品前處理方
法進(jìn)行處理,按選定的色譜條件進(jìn)行測定,外標(biāo)法定
量,測定結(jié)果如表2及分離譜圖3、4:

 

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