實(shí)驗(yàn)中遇到顯色弱靈敏度低的問(wèn)題原因分析
目前,Elisa方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測(cè)定。在Elisa試劑盒操作中,影響因素較多,而且其操作中有一定的技術(shù)要求,在檢測(cè)過(guò)程中除正常反應(yīng)外,有時(shí)常見(jiàn)到一些錯(cuò)誤的結(jié)果。如果在實(shí)驗(yàn)中遇到顯色弱靈敏度低的問(wèn)題,是什么原因造成的呢?
下面,上海勁馬就為大家分析一下可能的原因。
常見(jiàn)實(shí)驗(yàn)問(wèn)題:實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,包括陽(yáng)性對(duì)照、質(zhì)控在內(nèi)的所有板孔的顏色均較淡。
?可能原因:
1、試劑盒超過(guò)有效期;
2、試劑盒沒(méi)有按規(guī)定進(jìn)行保存,受高溫影響。
3、試劑、樣品用前沒(méi)有平衡至室溫;
4、加入試劑的體積和時(shí)間有誤,移液器計(jì)量不準(zhǔn),吸嘴內(nèi)水分太多或不清潔;
5、洗板及加樣過(guò)程中,酶標(biāo)受污染失活而失去催化顯色的能力;
6、溫育時(shí)間及溫育溫度未達(dá)到要求;
7、洗板次數(shù)太多,或濃縮洗液稀釋倍數(shù)不符合要求;洗滌沖擊力太大,浸泡時(shí)間太長(zhǎng);
8、顯色劑加入量不足或順序顛倒,或混合后加入;
9、底物作用時(shí)間不夠;
10、蒸餾水水質(zhì)有問(wèn)題。
常見(jiàn)實(shí)驗(yàn)問(wèn)題:實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,陰陽(yáng)性對(duì)照正常,質(zhì)控正常,但臨床標(biāo)本感覺(jué)顯色較弱。
1、待測(cè)標(biāo)本中可能不含強(qiáng)陽(yáng)性標(biāo)本,故結(jié)果可能是正常的;
2、標(biāo)本加入疊氮鈉作為防腐劑。
常見(jiàn)實(shí)驗(yàn)問(wèn)題:陰陽(yáng)性對(duì)照正常,但質(zhì)控、參考品或個(gè)別弱陽(yáng)性標(biāo)本未能檢出。
1、未達(dá)到要求的溫育溫度及溫育時(shí)間;
2、儀器設(shè)定不正確,濾光片不匹配。
常見(jiàn)實(shí)驗(yàn)問(wèn)題終止后,目測(cè)結(jié)果正常,但酶標(biāo)儀讀值結(jié)果偏低。
1、酶標(biāo)儀參數(shù)設(shè)定不正確。
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