轉(zhuǎn)印膜:用于蛋白質(zhì)和核酸的轉(zhuǎn)移和檢驗(yàn)過程的微孔膜。
Southern blot:又稱Southern印跡雜交,是研究DNA圖譜的基本技術(shù)。
Northern blot:又稱Northern印跡雜交,是檢測RNA的基本技術(shù)。
Western blot:又稱Western印跡雜交,是蛋白質(zhì)檢測分析的基本技術(shù)。
轉(zhuǎn)印膜在蛋白質(zhì)和核酸的轉(zhuǎn)移和檢測過程中應(yīng)用廣泛,不同的轉(zhuǎn)印膜規(guī)格和參數(shù)不同,選擇正確、均一穩(wěn)定的轉(zhuǎn)印膜對(duì)達(dá)到好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果起到關(guān)鍵性的作用。
常用的三種轉(zhuǎn)印膜:硝酸纖維素膜(NC膜)、帶正電的尼龍膜(N66膜)、聚偏氟乙烯膜(PVDF膜)
轉(zhuǎn)印
結(jié)合能力:帶正電的尼龍膜>PVDF膜>硝酸纖維素膜。
尼龍膜結(jié)合DNA和RNA能力可達(dá)480-600μg/cm2,可結(jié)合短至10bp的核酸片段;硝酸纖維素膜結(jié)合DNA和RNA能力可達(dá)80-100μg/cm2,對(duì)于200bp的核酸片段結(jié)合能力不強(qiáng);PVDF膜結(jié)合DNA和RNA能力可達(dá)125-300μg/cm2。
結(jié)合穩(wěn)定性
更好的機(jī)械強(qiáng)度和化學(xué)耐受性使PVDF膜在各種染色應(yīng)用和多重免疫檢測中成為理想選擇;而且單個(gè)凝膠的泳道復(fù)本可用于多種目的,特別是需要做N端蛋白測序,在相當(dāng)“嚴(yán)酷”的清洗條件下,當(dāng)尼龍膜或者硝酸纖維素膜已經(jīng)降解的情況下PVDF膜依然保持本色,所以PVDF也是要做蛋白測序的*選擇,但不適合熒光。PVDF膜特別注意的是需要100%甲醇預(yù)處理(不超過15秒)再用緩沖液平衡,才能用。
溫度耐受性:
尼龍膜經(jīng)烘烤或紫外線照射后,核酸中的部分嘧啶堿基可與膜上的正電荷結(jié)合;硝酸纖維素膜依靠疏水性相互作用結(jié)合DNA,結(jié)合不牢固;PVDF膜結(jié)合牢固,耐高溫,特別適合于蛋白印跡。
機(jī)械強(qiáng)度:
硝酸纖維素膜較脆,易破碎,不能重復(fù)使用;尼龍膜和PVDF膜機(jī)械強(qiáng)度較高,可重復(fù)使用。
價(jià)格比較:PVDF膜>硝酸纖維素膜>尼龍膜
可重復(fù)性:
尼龍膜可反復(fù)用于分子雜交,雜交后,探針分子可經(jīng)堿變性被洗脫下來;硝酸纖維素膜不能重復(fù)使用;PVDF膜可以重復(fù)使用。
操作簡便性
NC膜的使用很簡便,比如不需要甲醛預(yù)處理,只要在無離子水面浸潤排出膜內(nèi)氣泡,再在電泳緩沖液中平衡幾分鐘就可以了;比如NC膜很容易封閉,也不需要特別嚴(yán)謹(jǐn)?shù)那逑礂l件。轉(zhuǎn)移到NC膜上的蛋白在合適的條件下可以穩(wěn)定保存很長時(shí)間,不過要注意的是純的硝纖膜在比較脆,又容易卷,操作要小心,不適合用于需要多次重復(fù)清洗的用途。
背景:NC膜和PVDF背景較低;尼龍膜背景高。
注:
1、Biodyne B膜:通過高密度的季銨組來增加孔的表面。我們所生產(chǎn)的尼龍膜具有高的靈敏度,適用于各種核酸應(yīng)用。
BiodyneC膜:可以通過孔表面的羧基組耦合反應(yīng)來導(dǎo)出。
2、醋酸纖維素膜
由于醋酸纖維素薄膜對(duì)各種蛋白質(zhì)(包括血清白蛋白,溶菌酶及核糖核酸酶)都幾乎*不吸附,因此無拖尾現(xiàn)象;電泳后區(qū)帶界限清晰;通電時(shí)間較短(二十分鐘至一小時(shí));對(duì)染料也沒有吸附,因此不結(jié)合的染料能*洗掉,無樣品處幾乎*無色。由于醋酸纖維素薄膜吸水量較低,因此必需在密閉的容器中進(jìn)行電泳,并使用較低有電流避免蒸發(fā)。同時(shí)其對(duì)蛋白的結(jié)合能力較其它轉(zhuǎn)移膜弱些。
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源:化工儀器網(wǎng)”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品,未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的,應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用,并注明“來源:化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者,本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源(非化工儀器網(wǎng))的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對(duì)其真實(shí)性負(fù)責(zé),不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí),必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源,并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題,請(qǐng)?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。