按標(biāo)記物質(zhì)的種類，如熒光染料、放射性同位素、酶(主要有辣根過氧化物酶和堿性磷酸酶)、鐵蛋白、膠體金等，可分為免疫熒光法、放射免疫法、酶標(biāo)法和免疫金銀法等。按染色步驟可分為直接法(又稱一步法)和間接法(二步、三步或多步法)；按結(jié)合方式可分為抗原—抗體結(jié)合，如過氧化物酶-抗過氧化物酶（PAP）法和親和連接，如卵白素-生物素-過氧化物酶復(fù)合物（ABC）法、鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結(jié)（SP）法等，其中免疫組化SP法是常使用的方法。

一般的免疫組化sp法的實驗步驟具體如下：

1、烤片，68℃，20分鐘,

2、常規(guī)二甲苯脫蠟，梯度酒精脫水；二甲苯I 20min --二甲苯II 20 min--100%酒精I(xiàn) 10min --100%II 10min --95% 5min-- 80% 5min-- 70% 5min

3、阻斷 滅活內(nèi)源性過氧化物酶：3%H2O2 37℃孵育10min，PBS沖洗3X5min；

4、抗原修復(fù):置0.01M枸櫞酸緩沖液（PH 6.0）中用煮沸（95℃，15－20min），自然冷卻20min 以上，再用冷水沖洗缸子，加快冷卻至室溫，PBS沖洗3X5min。

5、正常羊血清工作液封閉，37℃10 min，傾去勿洗.

6、滴加一抗4℃ 冰箱孵育過夜，PBS沖洗3X5min（用PBS緩沖液代替一抗作陰性對照）；

滴加生物素標(biāo)記二抗, 37℃孵育30min, PBS沖洗3X5min;

7、滴加辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉素卵白素工作液，37℃孵育30min, PBS沖洗3X5min;

8、DAB/ H2O2反應(yīng)染色，自來水充分沖洗后，蘇木素復(fù)染，常規(guī)脫水，透明，干燥，封片。

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