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免疫組化SP法實(shí)驗(yàn)步驟有哪些

來(lái)源:北京索萊寶科技有限公司   2016年05月24日 09:51  
免疫組化SP(streptavidin-perosidase)法相信很多人都不陌生,其又稱之為鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶連結(jié)法,下面我們對(duì)其進(jìn)行詳細(xì)的介紹希望能幫助到大家。

按標(biāo)記物質(zhì)的種類,如熒光染料、放射性同位素、酶(主要有辣根過(guò)氧化物酶和堿性磷酸酶)、鐵蛋白、膠體金等,可分為免疫熒光法、放射免疫法、酶標(biāo)法和免疫金銀法等。按染色步驟可分為直接法(又稱一步法)和間接法(二步、三步或多步法);按結(jié)合方式可分為抗原—抗體結(jié)合,如過(guò)氧化物酶-抗過(guò)氧化物酶(PAP)法和親和連接,如卵白素-生物素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物(ABC)法、鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶連結(jié)(SP)法等,其中免疫組化SP法是常使用的方法。

一般的免疫組化sp法的實(shí)驗(yàn)步驟具體如下:

1、烤片,68℃,20分鐘,

2、常規(guī)二甲苯脫蠟,梯度酒精脫水;二甲苯I 20min --二甲苯II 20 min--100%酒精I(xiàn) 10min --100%II 10min --95% 5min-- 80% 5min-- 70% 5min

3、阻斷 滅活內(nèi)源性過(guò)氧化物酶:3%H2O2 37℃孵育10min,PBS沖洗3X5min;

4、抗原修復(fù):置0.01M枸櫞酸緩沖液(PH 6.0)中用煮沸(95℃,15-20min),自然冷卻20min 以上,再用冷水沖洗缸子,加快冷卻至室溫,PBS沖洗3X5min。

5、正常羊血清工作液封閉,37℃10 min,傾去勿洗.

6、滴加一抗4℃ 冰箱孵育過(guò)夜,PBS沖洗3X5min(用PBS緩沖液代替一抗作陰性對(duì)照);

滴加生物素標(biāo)記二抗, 37℃孵育30min, PBS沖洗3X5min;

7、滴加辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鏈霉素卵白素工作液,37℃孵育30min, PBS沖洗3X5min;

8、DAB/ H2O2反應(yīng)染色,自來(lái)水充分沖洗后,蘇木素復(fù)染,常規(guī)脫水,透明,干燥,封片。

以上就是對(duì)于“免疫組化SP法實(shí)驗(yàn)步驟有哪些”的詳細(xì)介紹,如果您對(duì)此還有什么地方不明白,或者想了解更多相關(guān)信息,可以直接咨詢我們?cè)诰€技術(shù)人員,為您提供更詳細(xì)的解決方案。

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