細(xì)胞制備流程及轉(zhuǎn)化方法

來源：上海研生實業(yè)有限公司 2016年08月05日 12:44

細(xì)胞制備流程及轉(zhuǎn)化方法
1. 轉(zhuǎn)移0.2-1ml培養(yǎng)物至裝有500ml LB(或其他營養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基)的1-2升搖瓶

2. 37°C下劇烈振蕩培養(yǎng)2-6小時

3. 定時監(jiān)控OD600值(培養(yǎng)1小時后每半小時測定一次)

4。當(dāng)OD600值達(dá)到0.5-1.0時，從搖床中取出搖瓶，置于冰上冷卻至少15分鐘(需要的話這種方式可以存放培養(yǎng)液數(shù)小時)

5. 細(xì)胞在4°C 5000g下離心15分鐘，棄上清液(如需要，沉淀可在4°C的10%甘油中保存一兩天)

6. 用滅菌的冰水重懸浮細(xì)胞。先用渦旋儀或吸液管重懸浮細(xì)胞于少量體積中(幾毫升)，然后加水稀釋至離心管的2/3體積。

7. 照上面步驟重復(fù)離心，小心棄去上清液

8. 照上面步驟用滅菌的冰水重懸浮細(xì)胞

9. 離心，棄上清液

10. 用20ml滅菌的、冰冷后的10%甘油重懸浮細(xì)胞

11. 照上面步驟離心，小心棄去上清液(沉淀可能會很松散)

12. 用10%甘油重懸浮細(xì)胞至zui終體積為2-3ml

13. 將細(xì)胞按150μl等份裝入微量離心管，于-80°C保存

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