目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-常量法>>酯酶系列>> BC5980-50T/48S丁酰膽*酯酶抑制劑活性檢測試劑盒
CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
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分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50T/48S |
貨號 | BC5980 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合 |
主要用途 | 丁酰膽*酯酶抑制劑活性檢測 |
丁酰膽*酯酶抑制劑活性檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
貨號: BC5980
規(guī)格: 50T/48S
產(chǎn)品組成:使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
提取液 | 液體60 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一 | 粉劑×2支 | -20℃保存 |
試劑二 | 液體40 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑三 | 液體35 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑四 | 粉劑×1瓶 | -20℃保存 |
試劑五 | 液體1 mL×1支 | -20℃保存 |
溶液的配制:
1. 試劑一:臨用前取1支試劑一,加入1.8mL蒸餾水,充分溶解,用不完的試劑-20℃分裝后可保存4周,避免反復(fù)凍融(該試劑為凍干試劑,可能存在不同瓶間肉眼觀察試劑量相差較大甚至量很少的現(xiàn)象,此現(xiàn)象不影響使用,實際質(zhì)量相同)。
2. 試劑四:臨用前加入17mL試劑二,充分溶解,用不完的試劑-20℃可分裝保存4周,避免反復(fù)凍融。
3. 試劑五:10mmol/L利凡斯的明溶液。臨用前取15μL 10mmol/L利凡斯的明溶液,加入985μL蒸餾水,配制成0.15mmol/L利凡斯的明溶液,現(xiàn)用現(xiàn)配(此試劑用于陽性管實驗,選做)。
產(chǎn)品說明:
丁酰膽*酯酶(Butyrylcholinesterase,BchE,EC3.1.1.8),又稱血漿膽*酯酶,假性膽*酯酶,是一種絲*酸水解酶,由肝臟合成后進(jìn)入血液,幾乎存在于所有動物組織中。與乙酰膽*酯酶(AchE)相比,BchE能夠有效水解較大的膽*酯,如丁酰膽*和苯甲酰膽*,而且可以清除有機磷類農(nóng)藥、氨基甲酸酯類農(nóng)藥等神經(jīng)毒劑的毒害作用。有研究表明,BchE可作為阿爾茨海默病治療的重要靶點,BchE抑制劑被用于改善阿爾茨海默病患者記憶力減退、認(rèn)知功能障礙等病征。
BchE催化丁酰膽*水解生成膽*,膽*與二硫代硝基 苯甲酸(DTNB)作用生成5-巰基-硝基 苯甲酸(TNB),BchE抑制劑通過抑制BchE活性,減少丁酰膽*的水解。TNB在412nm處有吸收峰,可通過測定412nm處吸光度的變化,計算BchE抑制劑活性。
注意:實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計、天平、烘箱、粉碎儀/研缽/勻漿器、30-50目篩、超聲清洗儀、離心機、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、1mL玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、冰和蒸餾水。
操作步驟:具體的操作步驟請見“產(chǎn)品資料"文件
注意事項:
1. 為保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性,請嚴(yán)格控制反應(yīng)時間和操作時間。
2. 樣本吸光度A’測定大于1.5或ΔA測定接近ΔA空白時,建議在樣本處理步驟增加組織樣本比例或?qū)⒎蹌颖九渲瞥筛邼舛鹊娜芤涸龠M(jìn)行測定。當(dāng)ΔA測定小于0.01時,可以將樣本用提取液稀釋后再進(jìn)行測定。
3. 若用于比較不同試劑、提取物、藥物或組織對BchE的抑制程度,必須將試劑、提取物、藥物或組織勻漿配制成相同濃度進(jìn)行比較。
實驗實例:
1. 取0.1005g柚果皮樣本(烘干),加入1mL提取液進(jìn)行超聲提取,離心后取上清,按照測定步驟操作,用1mL玻璃比色皿測得計算:ΔA空白=(A’空白1-A空白1)-(A’空白2-A空白2)=(1.372-0.205)-(0.166-0.112)=1.113,ΔA測定=(A’測定-A測定)-(A’空白2-A空白2)=(1.117-0.485)-(0.166-0.112)=0.578,計算抑制率得:
BchE抑制劑抑制率(%)=(1.113-0.578)÷1.113×100%=48.068%。
2. 取0.1014g柿果皮樣本(烘干),加入1mL提取液進(jìn)行超聲提取,離心后取上清,稀釋16倍后按照測定步驟操作,用1mL玻璃比色皿測得計算:ΔA空白=(A’空白1-A空白1)-(A’空白2-A空白2)=(1.372-0.205)-(0.166-0.112)=1.113,ΔA測定=(A’測定-A測定)-(A’空白2-A空白2)=(0.706-0.149)-(0.166-0.112)=0.503,計算抑制率得:
BchE抑制劑抑制率(%)=(1.113-0.503)÷1.113×100%=54.807%。
3. 取50μL 0.15mmol/L利凡斯的明溶液,按照測定步驟操作,用1mL玻璃比色皿測得計算:ΔA空白=(A’空白1-A空白1)-(A’空白2-A空白2)=(1.372-0.205)-(0.166-0.112)=1.113,ΔA測定=(A’測定-A測定)-(A’空白2-A空白2)=(0.838-0.171)-(0.166-0.112)=0.613,計算抑制率得:
BchE抑制劑抑制率(%)=(1.113-0.613)÷1.113×100%=44.924%。
參考文獻(xiàn):
[1] Ellman GL, Courtney KD, Andres V Jr. et al. A new and rapid colorimetric determination of acetylcholinesterase activity [J]. Biochemical Pharmacology, 1961, 7(2): 88-95.
[2] Noor Atatreh, Sara Al Rawashdah, Shaikha S Al Neyadi. et al. Discovery of new butyrylcholinesterase inhibitors via structure-based virtual screening [J]. Journal of Enzyme Inhibition and Medicinal Chemistry, 2019, 34(1): 1373-1379.
[3] Li Q, Chen Y, Xing S. et al. Highly Potent and Selective Butyrylcholinesterase Inhibitors for Cognitive Improvement and Neuroprotection [J]. Journal of Medicinal Chemistry, 2021, 64(10): 6856-6876.
相關(guān)系列產(chǎn)品:
BC0840/BC0845 羧酸酯酶(CarE)活性檢測試劑盒
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BC2140/BC2145 組織及血液堿性磷酸酶(AKP/ALP)活性檢測試劑盒
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