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相關(guān)知識(shí)>>>>>

多克隆抗體的制備一般包括以下幾個(gè)步驟:
  1、制備抗原。  
 2、選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。
  3、動(dòng)物免疫。  
 4、試取血進(jìn)行測(cè)試,看看是否成功免疫。
  5、如果成功免疫,殺死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,采集全部血清。
  6、純化出抗體。  
 7、鑒定抗體。包括純度以及特異性。
 
 抗體結(jié)構(gòu):
  抗體是具有4條多肽鏈的對(duì)稱結(jié)構(gòu),其中2條較長(zhǎng)、相對(duì)分子量較大的相同的重鏈(H鏈);2條較短、相對(duì)分子量較小的相同的輕鏈(L鏈)。鏈間由二硫鍵和非共價(jià)鍵聯(lián)結(jié)形成一個(gè)由4條多肽鏈構(gòu)成的單體分子。輕鏈有κ和λ兩種,重鏈有μ、δ、γ、ε和α五種。 整個(gè)抗體分子可分為恒定區(qū)和可變區(qū)兩部分。在給定的物種中,不同抗體分子的恒定區(qū)都具有相同的或幾乎相同的氨基酸序列??勺儏^(qū)位于"Y"的兩臂末端。在可變區(qū)內(nèi)有一小部分氨基酸殘基變化特別強(qiáng)烈,這些氨基酸的殘基組成和排列順序更易發(fā)生變異區(qū)域稱高變區(qū)。高變區(qū)位于分子表面,zui多由17個(gè)氨基酸殘基構(gòu)成,少則只有2 ~ 3個(gè)。高變區(qū)氨基酸序列決定了該抗體結(jié)合抗原抗原的特異性。一個(gè)抗體分子上的兩個(gè)抗原結(jié)合部位是相同的,位于兩臂末端稱抗原結(jié)合片段(antigen-binding fragment, Fab)。"Y"的柄部稱結(jié)晶片段(crystalline fragment,FC),糖結(jié)合在FC
生物活性:
 ?。?)特異性結(jié)合抗原:抗體本身不能直接溶解或殺傷帶有特異抗原的靶細(xì)胞,通常需要補(bǔ)體或吞噬細(xì)胞等共同發(fā)揮效應(yīng)以清除病原微生物或?qū)е虏±頁(yè)p傷。然而,抗體可通過(guò)與病毒或毒素的特異性結(jié)合,直接發(fā)揮中和病毒的作用。  
?。?)激活補(bǔ)體:IgM、IgG1、IgG2和IgG3可通過(guò)經(jīng)典途徑激活補(bǔ)體,凝聚的IgA、IgG4和IgE可通過(guò)替代途徑激活補(bǔ)體。
 ?。?)結(jié)合細(xì)胞:不同類別的免疫球蛋白,可結(jié)合不同種的細(xì)胞,產(chǎn)生不同的疚,參與免疫應(yīng)答。
 ?。?)可通過(guò)胎盤及粘膜:免疫球蛋白G(IgG)能通過(guò)胎盤進(jìn)入胎兒血流中,使胎兒形成自然被動(dòng)免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通過(guò)消化道及呼吸道粘膜,是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。
 ?。?)具有抗原性:抗體分子是一種蛋白質(zhì),也具有刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的性能。不同的免疫球蛋白分子,各具有不同的抗原性。
  (6)抗體對(duì)理化因子的抵抗力與一般球蛋白相同:不耐熱,60~70℃即被破壞。各種酶及能使蛋白質(zhì)凝固變性的物質(zhì),均能破壞抗體的作用??贵w可被中性鹽類沉淀。在生產(chǎn)上??捎昧蛩徜@或硫酸鈉從免疫血清中沉淀出含有抗體的球蛋白,再經(jīng)透析法將其純化。
 ?。?)通過(guò)與細(xì)胞Fc受體結(jié)合發(fā)揮多種生物效應(yīng)   ①調(diào)理作用   IgG、IgM的Fc段與吞噬細(xì)胞表面的FcγR、FcμR結(jié)合,增強(qiáng)其吞噬能力,通常將抗體促進(jìn)吞噬細(xì)胞吞噬功能的作用稱為抗體的調(diào)理作用 (opsonization)。  ?、诎l(fā)揮抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)
單克隆抗體和多克隆抗體有什么區(qū)別?
抗原上那部分可以引起機(jī)體產(chǎn)生抗體的分子結(jié)構(gòu),叫做抗原決定簇。一個(gè)抗原上可以有好幾個(gè)不同的抗原決定簇,因而使機(jī)體產(chǎn)生好幾種不同的抗體,zui終產(chǎn)生出抗體是漿細(xì)胞。只針對(duì)一個(gè)抗原決定簇起作用的漿細(xì)胞群就是一個(gè)純系,純系的英文為Clone,音譯就是克隆。
由一種克隆產(chǎn)生的特異性抗體叫做單克隆抗體。單克隆抗體能目標(biāo)明確地與單一的特異抗原決定簇結(jié)合,就象導(dǎo)彈精確地命中目標(biāo)一樣。另一方面,即使是同一個(gè)抗原決定簇,在機(jī)體內(nèi)也可以由好幾種克隆來(lái)產(chǎn)生抗體,形成好幾種單克隆抗體混雜物,稱為多克隆抗體。<
抗體的效價(jià)鑒定:
不管是用于診斷還是用于治療,制備抗體的目的都是要求較高效價(jià)。不同的抗原制備的抗體,要求的效價(jià)不一。鑒定效價(jià)的方法很多,包括有試管凝集反應(yīng)、瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)等。常用的抗原所制備的抗體一般都有約成的鑒定效價(jià)的方法,以資比較。如制備抗抗體的效價(jià),一般就采用瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)來(lái)鑒定。



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