氨基酸分析法是指用于測(cè)定蛋白質(zhì)、肽及其他藥物制劑的氨基酸組成或含量的方法。
根據(jù)氨基酸組成分析可以對(duì)蛋白質(zhì)及肽進(jìn)行鑒別，氨基酸分析法可用于確定蛋白質(zhì)、肽及氨基酸的含量，及測(cè)定可能存在于蛋白質(zhì)及肽中的非典型氨基酸。進(jìn)行氨基酸分析前，必須將蛋白質(zhì)及肽水解成單個(gè)氨基酸，具體水解方法由各品種項(xiàng)下規(guī)定。蛋白質(zhì)及肽水解后，其氨基酸分析過(guò)程與用于其他藥物制劑中游離氨基酸的分析過(guò)程相同。
本法包括四種柱前衍生法，分別為異硫氰酸本酯（PITC）法、6-氨基喹啉－N－羥基琥珀酰亞氨基氨基JIA酸酯（AQC）法、鄰本二醛（OPA）和9-芴JIA基氯JIA酸JIA酯（FMOC）法、2，4-二硝基氟本（DNFB）法，以及一種茚三酮柱后衍生法。不同的品種應(yīng)針對(duì)自身所含的氨基酸種類(lèi)及各氨基酸的含量選擇適宜的氨基酸分析方法并做相應(yīng)的方法學(xué)驗(yàn)證。
由于本法衍生過(guò)程中衍生溶液量較少，且容易揮發(fā)，外標(biāo)法極易出現(xiàn)較大的誤差，建議采用內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行測(cè)定，內(nèi)標(biāo)的確定由各品種項(xiàng)下規(guī)定。在本法中，由于半胱氨酸或胱氨酸的衍生產(chǎn)物不穩(wěn)定，因此對(duì)于含半胱氨酸或胱氨酸的樣品衍生后應(yīng)盡快測(cè)定，或者在衍生前對(duì)半胱氨酸或胱氨酸進(jìn)行適當(dāng)?shù)奶幚?，使其轉(zhuǎn)化為穩(wěn)定地產(chǎn)物（如磺基丙氨酸或半胱氨酸-硫代丙酸）后再衍生測(cè)定，具體方法由各品種項(xiàng)下規(guī)定。在測(cè)定過(guò)程中，可根據(jù)所用的儀器、色譜柱品牌、色譜柱的長(zhǎng)度及要分離的氨基酸種類(lèi)，對(duì)流動(dòng)相的有機(jī)溶劑和洗脫梯度作適當(dāng)調(diào)整以獲得較好的分離度。
*法 PITC柱前衍生氨基酸分析法
本法系根據(jù)氨基酸與異硫氰酸本酯（PITC）反應(yīng)，生成有紫外響應(yīng)的氨基酸衍生物本氨基硫JIA酰氨基酸（PTC-氨基酸），PTC-氨基酸經(jīng)反相液相色譜分離后用紫外檢測(cè)，在一定的范圍內(nèi)其吸光值與氨基酸濃度成正比。本方法的線性濃度范圍為0.025～1.25µmol/ml。
試劑  （1）流動(dòng)相A    0.1mol/L醋酸鈉溶液（取無(wú)水醋酸鈉8.2g，加水900ml溶解，用冰醋酸調(diào)pH至6.5，然后加水至1000 ml）-乙腈（93:7）。
（2）流動(dòng)相B  乙腈－水（8：2）。
對(duì)照品溶液   按各品種項(xiàng)下規(guī)定的方法制備。
供試品溶液   按各品種項(xiàng)下規(guī)定的方法制備。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)  用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（SMA氨基酸分析色譜柱）；流速為每分鐘1.0ml；柱溫為40℃；檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm。各氨基酸峰間的分離度均應(yīng)大于1.0。洗脫梯度如下：
時(shí)間（min）流動(dòng)相A（%）流動(dòng)相B（%）
01000
148515
296634
300100
370100
37.11000
451000

測(cè)定法  精密量取氨基酸對(duì)照品溶液200μl，置一2ml塑料離心管中，精密加入1mol/L三乙胺乙腈溶液100μl，混勻，精密加入0.1mol/L異硫氰酸本酯乙腈溶液100μl，混勻，室溫放置1小時(shí)，加0.8ml正己烷，劇烈振搖，放置10min，精密取下層溶液2μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另精密量取供試品溶液200μl，自“置一2ml塑料離心管中”起同法測(cè)定。