非標定量（Label-free）實驗

非標定量(Label-free)

非標定量(Label-fiee) :是一種非標記的差異蛋白質組學技術,不需要使用同位素標記物標記肽段，直接根據質譜峰的信號強度來對肽段或蛋白進行相對定量。Label-free通過HPLC分級液質聯(lián)用對酶解肽段進行分析. 現(xiàn)在基于質譜的非標定量技術主要有兩種: 一是根據一級質譜相關的肽段峰強度以及峰面積等信息進行蛋白定量，二是根據蛋白對應肽段的二級質譜總數(shù)(spectral counts)進行定量。

實驗步驟

1.蛋白前期處理，包括去除核酸，蛋白純化定量，SDS聚丙烯酰氨凝膠電泳;

2.蛋白質膠內酶切;

3.多肽純化; .

4.多肽混合物的質譜分析，包括質譜鑒定和定量信息比較;

5.生信分析

結果展示

實驗周期及交付標準

1.實驗周期: 4-6周

2.交付標準:蛋白定量結果、鑒定結果、質譜原始數(shù)據、生信分析結果(G0分析. KEGG分析等等)

需確認的信息

1.樣本的種屬

2.樣本的類型(組織or細胞or血液)

3.樣本的數(shù)量及分組

4.分析要求

參考文獻

[1]HuS, Qiu N, Liu Y , et al. Identification and comparative proteomic study of quail and duck egg white protein using 2-dimensional gel electrophoresis and matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight tandem mass spectrometryanalysis[J]. Poultry Science, 2016:pew033.

[2] Bouvet M , Turkieh A，Acosta-Martin A E , et al. Proteomic Profiling of Macrophages by 2D Electrophoresis[J]. Journal

of Visualized Experiments, 2014(93).

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