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PCT降鈣素原試劑盒

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廣州健侖生物科技有限公司
2015-12-01 20:05:59
廣州市
中國
1740

【簡單介紹】

人降鈣素原(PCT) 酶聯(lián)免疫分析試劑盒

【詳細(xì)說明】

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：人降鈣素原（PCT）酶聯(lián)免疫分析試劑盒

英文名稱：PCT Quantitative Enzyme-linked Immunosorbent Assay Kit

【包裝規(guī)格】 96人份/盒

【預(yù)期用途】

本試劑盒采用ELISA雙抗體酶聯(lián)免疫夾心法定量檢測人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中降鈣素原（PCT）含量。適用于嚴(yán)重感染或膿毒血癥的早期診斷；全身性感染與非細(xì)菌性炎癥反應(yīng)（如自身免疫性疾?。┑蔫b別診斷；全身性細(xì)菌性感染與病毒感染的鑒別診斷；全身性細(xì)菌/真菌感染與器官移植排斥和移植后病毒感染的鑒別診斷；作為高?；颊撸ㄈ鏘CU、器官移植術(shù)后或接受免疫抑制治療的患者）感染性疾病的監(jiān)測指標(biāo)。

【臨床意義】
人降鈣素原（PCT）是人降鈣素的前體物，無激素活性，其在健康人血清中水平極低，但在全身性細(xì)菌感染患者血清中含量迅速升高，感染后兩個小時即可檢測到，且持續(xù)時間長，其在血清中的水平與感染性疾病的嚴(yán)重程度呈正相關(guān),經(jīng)有效抗生素治療后，PCT水平可迅速下降，而病毒感染、腫瘤、自身免疫性疾病、外傷（多創(chuàng)傷或手術(shù)創(chuàng)傷）、臨床用藥、慢性炎癥以及局部感染者，PCT水平維持在正常范圍內(nèi)或者有輕度升高。因此，PCT是細(xì)菌感染所致重癥全身性炎癥反應(yīng)的良好指標(biāo)，在全身性細(xì)菌感染和膿毒癥輔助鑒別診斷、預(yù)后判斷、療效觀察等方面有很高的臨床價值。

在局限性感染、病毒感染、自身免疫性疾病、手術(shù)創(chuàng)傷和慢性炎癥時，其血漿濃度正?；蜉p度升高；嚴(yán)重細(xì)菌感染或霉菌、寄生蟲感染（如腹膜炎、軟組織感染、蜂窩組織炎、吻合口漏、肺炎、ARDS）時大量上升，特別是膿毒性休克時PCT時濃度成倍升高。因此，利用它能有效地評估感染和炎癥的嚴(yán)重程度及進(jìn)展情況，還能監(jiān)測藥物療效，指導(dǎo)外科圍手術(shù)期的處理以及抗生素正確應(yīng)用。

作為高危患者（如ICU、器官移植術(shù)后或接受免疫抑制治療的患者）感染性疾病的監(jiān)測指標(biāo)；早期預(yù)測膿毒性休克、多器官功能不全綜合征（MODS）、成人呼吸窘迫綜合征（ARDS）及多器官功能障礙（MOF）的發(fā)生及判斷疾病預(yù)后等。

【檢測原理】

本試劑盒采用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人降鈣素原（PCT）水平。用純化的人降鈣素原（PCT）抗體包被反應(yīng)板，加入待測標(biāo)本孵育后，再加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的PCT抗體。如果標(biāo)本中含有PCT，則能與包被在反應(yīng)板上的PCT抗體結(jié)合，并與HRP標(biāo)記的PCT抗體形成復(fù)合物，經(jīng)洗滌后加入TMB底物，TMB在HRP酶的催化下產(chǎn)生藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成黃色。酶標(biāo)儀在450nm波長下測定的吸光度（OD值）與標(biāo)本中PCT含量呈線性關(guān)系。通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線可以計(jì)算出標(biāo)本中PCT的含量。

【主要組成成份】

序號	項(xiàng)目	容量	數(shù)量
1	濃縮洗滌液（30×）	20 mL	1瓶
2	酶標(biāo)試劑	6mL	1瓶
3	酶標(biāo)包被板	12孔×8條	1塊
4	樣品稀釋液	6mL	1瓶
5	顯色劑A液	6mL	1瓶
6	顯色劑B液	6mL	1瓶
7	終止液	6mL	1瓶
8	標(biāo)準(zhǔn)品（2400 ng/L）	0.5 mL	1瓶
9	標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液	1.5 mL	1瓶

注：使用時，先將瓶中內(nèi)容物搖勻，不同批號試劑盒組份請勿混用

【儲存條件及有效期】

1、儲存條件：2～8℃避光保存。

2、有效期：2～8℃避光保存，自半成品檢定合格之日起，有效期6個月。

【適用儀器】

酶聯(lián)檢測系統(tǒng)：

①	洗板機(jī)（非必須）	一臺
②	酶標(biāo)儀	一臺
③	恒溫箱	一臺

【樣本要求】

1、本試劑盒適用于定量檢測人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中降鈣素原（PCT）含量。

2、血清：全血標(biāo)本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000 g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

3、血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于1000 g離心15分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

4、其它生物標(biāo)本：1000 g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

5、樣本使用前應(yīng)置于室溫（18～30℃）平衡30分鐘。

6、樣本稀釋時應(yīng)充分混勻，盡量避免起泡，可上下顛倒混和，不要在混勻器上強(qiáng)烈振蕩。

7、樣本采集和處理時應(yīng)戴口罩和手套，避免汗液、唾液及其氣溶膠污染樣本。

8、樣本檢測前如需運(yùn)輸，建議運(yùn)輸時保持2-8℃（冰盒）或-20℃（干冰），不要超過上述保存期限。

9、不能檢測含NaN₃的樣品，因NaN₃抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性

【檢驗(yàn)方法】

1、試劑、樣本準(zhǔn)備

⑴ 試劑準(zhǔn)備

① 將試劑盒置室溫（18～26℃）平衡15～30分鐘。

② 從試劑盒中取出濃縮洗滌液，用新鮮的純化水1：1稀釋后加入洗板機(jī)的洗液瓶中。

⑵ 樣本準(zhǔn)備

標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液按照下圖表將標(biāo)準(zhǔn)品稀釋，制備1-5號標(biāo)準(zhǔn)樣品。為保證結(jié)果的準(zhǔn)確性，每次實(shí)驗(yàn)請配置新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

1200 ng/L	5號標(biāo)準(zhǔn)品	150 μL的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150 μL標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
600 ng/L	4號標(biāo)準(zhǔn)品	150 μL的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150 μL標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
300 ng/L	3號標(biāo)準(zhǔn)品	150 μL的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150 μL標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
150 ng/L	2號標(biāo)準(zhǔn)品	150 μL的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150 μL標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
75 ng/L	1號標(biāo)準(zhǔn)品	150 μL的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150 μL標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

2、試驗(yàn)條件

在室溫（18～26℃）嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

3、操作步驟

（1）取出所需的PCT抗體包被板反應(yīng)條置于微孔架上（立即將剩余的微孔反應(yīng)條放回鋁箔袋中，并重新密封鋁箔袋）。

（2）分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50 μL，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40 μL，然后再加待測樣品10 μL（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，置37℃恒溫箱孵育30分鐘。

（3）小心揭掉封板膜，棄去孔內(nèi)液體，洗滌液注滿各孔、靜置30秒，甩干，重復(fù)5次，拍干?；蛘呃孟窗鍣C(jī)洗滌：程序4個循環(huán)，每孔350 μL，洗滌后拍干。

（4）加入酶結(jié)合物，每孔加入酶標(biāo)試劑50 μL，空白孔除外，充分混勻，置37℃恒溫箱孵育30分鐘。

（5）重復(fù)操作程序③

（6）加入顯色劑A50 μL，再加入顯色劑B50 μL，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

（7）每孔加終止液每孔50 μL，充分混勻，終止反應(yīng)。

（8）以空白孔調(diào)0，用酶標(biāo)儀依序測量各孔在450 nm波長的吸光度（OD值）。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

4、試驗(yàn)結(jié)果的計(jì)算

可以采用作圖法或計(jì)算法進(jìn)行結(jié)果計(jì)算，推薦采用計(jì)算法。

作圖法：以標(biāo)準(zhǔn)品抗原含量為橫坐標(biāo)（x），以其對應(yīng)的吸光值（OD值）為縱坐標(biāo)（y）繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后根據(jù)檢測樣本測得的吸光度（OD值）在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出相應(yīng)的樣本抗原含量，再乘以樣本稀釋倍數(shù)，即為樣本的實(shí)際濃度。

計(jì)算法：以標(biāo)準(zhǔn)品抗原含量為自變量（x），以其對應(yīng)的吸光值（OD值）為應(yīng)變量（y），求出回歸方程，將待測樣本的吸光值代入回歸方程，求得對應(yīng)的標(biāo)本抗原含量，再乘以樣本稀釋倍數(shù)，即為樣本的實(shí)際濃度。

【檢測范圍】

75ng/L -1200ng/L

【參考值（參考范圍）】

健康人：<500 ng/L

【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

對PCT陽性檢出者，應(yīng)結(jié)合病史、臨床癥狀及體征等綜合判斷。以PCT含量<500 ng/L的為陰性，對PCT含量在100~500 ng/L之間者，建議動態(tài)觀察。對PCT含量大于1200 ng/L的樣本，應(yīng)準(zhǔn)確稀釋后重做，zui后將測得的PCT含量乘稀釋倍數(shù)即為該樣本實(shí)際PCT含量。

【檢驗(yàn)方法的局限性】

PCT的水平作為診斷、監(jiān)測重癥感染患者的常規(guī)指標(biāo)，不能作為是否存在細(xì)菌和病毒感染的*依據(jù)。對PCT檢測結(jié)果的解釋需結(jié)合其他臨床檢查結(jié)果和根據(jù)臨床疾病診斷的程序。

需要注意的是：

（1）在病毒感染或非感染性炎癥反應(yīng)時，血PCT水平不升高或僅有輕度升高。

（2） PCT水平測定不能特異性反映病原體類型及其對抗生素的敏感性和耐藥性；必須同時結(jié)合病原學(xué)檢查和藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果以提高治療的針對性。

（3）接受OKT3免疫抑制治療的移植患者PCT水平常有提高，這可能是細(xì)胞因子釋放綜合征的繼發(fā)表現(xiàn)，應(yīng)用OKT3后PCT水平的升高并不一定提示感染的存在，須結(jié)合其他指標(biāo)綜合分析。

（4）膿毒血癥患者不論是否接受免疫抑制治療，其在發(fā)生膿毒癥的zui初3天內(nèi)PCT水平并無差異，隨后免疫缺陷患者在第3～5天時PCT 值有所減低，而免疫力正常的患者至第5天后PCT水平才開始下降,對于膿毒血癥患者建議采取動態(tài)觀察。

【產(chǎn)品性能指標(biāo)】

1. 特異性：

20份正常人血清PCT 檢測結(jié)果不得出現(xiàn)一份大于500 ng/L。

2. zui低檢出量：zui低檢出量為40 ng/L。

3. 線性范圍：75ng/L～1200ng/L，相關(guān)系數(shù)r應(yīng)不低于0.98。

4. 穩(wěn)定性：37℃放置3天，檢定結(jié)果應(yīng)達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)。

【注意事項(xiàng)】

1．試劑盒使用前應(yīng)置于室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2．使用時，先將瓶中內(nèi)容物搖勻，不同批號試劑盒組份請勿混用。

3．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。

4．嚴(yán)格控制反應(yīng)時間和顯色時間，一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)。

5．本試劑盒為一次性用品，使用后的試劑盒和樣本等廢棄物應(yīng)作為傳染源按照國家相關(guān)規(guī)定處理。

6．底物請避光保存。

7．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

8．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)，無效結(jié)果必須重測。

9．本試劑盒采用硫酸作為終止液，其具有輕微的腐蝕性，使用時應(yīng)避免接觸衣物或眼、手等皮膚暴露部位。

【生產(chǎn)企業(yè)】廣州健侖生物科技有限公司
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