AGN水溶液公司正在銷售的產(chǎn)品：綿羊白介素4(IL-4)試劑盒Anti-HIST1H2BB Antibody熒光素FITC標(biāo)記羊IgG(流式同型對(duì)照)
綿羊血小板相關(guān)球蛋白(PAIg)試劑盒 Anti-HIST1H2BH Antibody熒光素標(biāo)記羊IgM
綿羊胱天蛋白酶14(CASP14)試劑盒 Anti-HIRA Antibody熒光素標(biāo)記豚鼠IgG
綿羊α1酸性糖蛋白(α1-AGP)試劑盒A

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產(chǎn)品分類：染色其他

儲(chǔ)存條件：4℃,避光,6個(gè)月

用途：組織切片染色

注意事項(xiàng)：玻璃器皿需要侵泡并清洗干凈、烘干。

 

 

配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理：

1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因；

EDTA是四元酸，是一種白色晶體粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室溫溶解度為0.02g/100g H2O。

2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑，基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理：稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層，然后用水洗凈，烘干。

配制步驟：

1、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自來(lái)水、純水洗凈，烘干、冷卻。

2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15～0.2g Zn，蓋好小表面皿。

3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中，用純水稀釋至標(biāo)線，搖勻。

 

 

實(shí)驗(yàn)方法與判定：

1.對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性

2.對(duì)照品溶液的配制：精密量取腦對(duì)照品適量，加無(wú)水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

3.色譜條件：以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱；柱溫120℃；進(jìn)樣口溫度250℃；檢測(cè)器溫度250℃；分流進(jìn)樣，分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000。

4.實(shí)驗(yàn)方法：配制的對(duì)照品溶液，一份置冷處保存，一份置室溫中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份對(duì)照品溶液，三種儲(chǔ)備液同時(shí)稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法，并依據(jù)新對(duì)照品的峰面積計(jì)算原對(duì)照品溶液的含量。記錄下來(lái)，保證原對(duì)照品溶液含量在考察期相對(duì)平均偏差不超過(guò)2.0%，驗(yàn)證對(duì)照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。

葡萄座腔菌屬磷化HER2受體抗體Human IVL(Involucrin) ELISA Kit人G蛋白偶合受體44(GPR44/CRTH2/DL1R)免疫試劑盒

糙孢籃狀菌磷化HER2受體抗體Human NSMAF (Protein FAN) ELISA KIT人GTPNRas(NRAS)免疫試劑盒

綠色木霉=木木霉磷化HER3受體抗體Human NCEH1 (Neutral cholesterol ester hydrolase 1) ELISA KIT人Gremlin-1蛋白(GREM1)免疫試劑盒

堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌磷化HER4抗體Human PILRB(Paired immunoglobulin-like type 2 receptor beta) ELISA Kit人GDP解離抑制因子2(GdI2)免疫試劑盒

扣囊復(fù)膜孢酵母磷化HER4抗體Human NPTXR(Neuronal pentraxin receptor) ELISA Kit人GAD/IA2自身抗體免疫試劑盒

球形芽孢桿菌轉(zhuǎn)錄因子ERF抗體Human NCF1 (Neutrophil cytosol factor 1) ELISA KIT人G1/S特異性周期蛋白E1(CCNE1)免疫試劑盒

地中海擬無(wú)枝菌磷化轉(zhuǎn)錄因子ERF抗體Human MAP2(Microtubule-associated protein 2) ELISA Kit人F-肌動(dòng)蛋白(F-actin)免疫試劑盒

熱帶假絲酵母真核肽鏈釋放因子1抗體Human NPSR1 (Neuropeptide S receptor) ELISA KIT人FOS 樣抗原2(FOSL2)免疫試劑盒

出芽短梗霉真核肽鏈釋放因子3a抗體Human NPFF (Pro-FMRFamide-related neuropeptide FF) ELISA KIT人FMS樣酪激3配體(Flt-3L)免疫試劑盒

空腸彎曲桿菌表皮生長(zhǎng)因子受體底物15抗體Human GAP43(Neuromodulin) ELISA Kit人FMS樣酪激3(Flt3)免疫試劑盒

佛雷德里克斯堡假單胞菌內(nèi)吞作用輔助蛋白EPN1抗體Human NETO1 (Neuropilin and tolloid-like protein 1) ELISA KIT人Fc受體樣蛋白3(FCRL3)免疫試劑盒

Aurantimonas coralicida內(nèi)吞作用輔助蛋白EPN2抗體Human NLK (Serine/threonine-protein kinase NLK) ELISA KIT人FAM172A蛋白(FAM172A)免疫試劑盒

疏水戈登氏菌內(nèi)質(zhì)網(wǎng)定位蛋白ERGI3抗體Human NSF (Vesicle-fusing ATPase) ELISA KIT人E選擇(E-Selectin/CD62E)免疫試劑盒

熒光假單胞菌內(nèi)質(zhì)網(wǎng)氧化物蛋白Ero1-Lα抗體Human NRSN1 (Neurensin-1) ELISA KIT人E鈣粘著蛋白/上皮性鈣黏附蛋白(E-Cad)免疫試劑盒

濟(jì)州單胞菌內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白ERp19抗體Human NANP (N-acylneuraminate-9-phosphatase) ELISA KIT人ES1蛋白同系物，線粒體(C21orf33/HES1/KNPI)免疫試劑盒

黑根霉內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白ERp72抗體Human MYNN (Myoneurin) ELISA KIT人Ephrin-B2(EFNB2)免疫試劑盒

牛葡萄球菌Staphylococcus│bovis 質(zhì)量規(guī)格：10μg/ml,u=6%番茄紅

漢遜德巴酵母Debaryomyces│hansenii 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.5%丹寧/單寧

黃色短桿菌Brevibacterium│flavum 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品
AGN水溶液FPB(Human fibrinopeptide B) ELISA Kit  人血纖肽/纖維蛋白肽B規(guī)格： 48T

PLGA(Human plasminogen activator) ELISA Kit  人纖溶mei原激活劑規(guī)格： 48T

SmIg(Human Surface Membrane Immunoglobulin) ELISA Kit  人細(xì)胞膜表面免疫球蛋白規(guī)格： 48T

PA(Human prealbumin) ELISA Kit  人前白蛋白規(guī)格： 48T

CG(Human Cryoglobulin) ELISA Kit  人冷球蛋白規(guī)格： 48T

使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來(lái)篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型，培養(yǎng)基，生長(zhǎng)條件和細(xì)胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過(guò)建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線，來(lái)確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL；細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度，可通過(guò)建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來(lái)實(shí)現(xiàn)，至少選擇5個(gè)濃度。

1）  第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過(guò)夜；注：對(duì)于需要更高密度來(lái)檢測(cè)活力的細(xì)胞，可增加接種量。

2）  根據(jù)細(xì)胞類型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例，可設(shè)定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。

4）  接下來(lái)每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來(lái)確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長(zhǎng)的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。

3.   穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選

1）  轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來(lái)傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過(guò)于稠密，其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過(guò)25%

2）  每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

3）  篩選7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克隆（集落）的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間，這取決于宿主細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。

4）   挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

5）   之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。