Tris-EDTA抗原修復(fù)液公司正在銷(xiāo)售的產(chǎn)品：大鼠胰高血糖素(GC)試劑盒Anti-NOTCH1 Antibody游離狀腺原T3
大鼠促性腺釋放(GnRH)試劑盒Anti-NOTCH1 Antibody大鼠乙脫氫酶
大鼠粒趨化蛋白2(GCP-2)試劑盒Anti-NOTCH2 Antibody小鼠Slit2
大鼠熱休克蛋白27(HSP-27)試劑盒Anti-NOXO1 Antibody人表皮生長(zhǎng)因

公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡(jiǎn)單、易保存等特點(diǎn)，咨詢(xún)并訂購(gòu)！

產(chǎn)品分類(lèi)：免疫組化

儲(chǔ)存條件：室溫,12個(gè)月

用途：抗原修復(fù)緩沖液

注意事項(xiàng)：主要由EDTA、Tris等組成,調(diào)PH8.0

 

 

配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理：

1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因；

EDTA是四元酸，是一種白色晶體粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室溫溶解度為0.02g/100g H2O。

2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑，基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理：稱(chēng)量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層，然后用水洗凈，烘干。

配制步驟：

1、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自來(lái)水、純水洗凈，烘干、冷卻。

2、用直接稱(chēng)量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱(chēng)取0.15～0.2g Zn，蓋好小表面皿。

3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中，用純水稀釋至標(biāo)線，搖勻。

 

 

實(shí)驗(yàn)方法與判定：

1.對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性

2.對(duì)照品溶液的配制：精密量取腦對(duì)照品適量，加無(wú)水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

3.色譜條件：以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱；柱溫120℃；進(jìn)樣口溫度250℃；檢測(cè)器溫度250℃；分流進(jìn)樣，分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000。

4.實(shí)驗(yàn)方法：配制的對(duì)照品溶液，一份置冷處保存，一份置室溫中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份對(duì)照品溶液，三種儲(chǔ)備液同時(shí)稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法，并依據(jù)新對(duì)照品的峰面積計(jì)算原對(duì)照品溶液的含量。記錄下來(lái)，保證原對(duì)照品溶液含量在考察期相對(duì)平均偏差不超過(guò)2.0%，驗(yàn)證對(duì)照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。

桑炭疽盤(pán)菌谷脫羧-65抗體Human TBCD ELISA Kit大鼠甲狀腺過(guò)氧化物(TPO)IgG抗體免疫試劑盒

乳乳球菌乳亞種谷脫羧-65抗體(C端）Human TAF7 ELISA Kit大鼠甲狀腺過(guò)氧化物(TPO)免疫試劑盒

粉擬青霉半乳糖凝集3抗體Human MTTP(Microsomal triglyceride transfer protein large subunit) ELISA Kit大鼠甲狀旁腺激相關(guān)蛋白(PTHrP)免疫試劑盒

黑色附球孢菌神經(jīng)生長(zhǎng)相關(guān)蛋白43Human TASP1 ELISA Kit大鼠甲狀旁腺激(PTH)免疫試劑盒

鼠李糖乳桿菌3-磷甘油脫氫（兔來(lái)源免疫組化用抗體）Human TARSL2 ELISA Kit大鼠甲種胎兒球蛋白/甲胎蛋白(AFP)免疫試劑盒

布蘭克假絲酵母3-磷甘油脫氫單克抗體(內(nèi)參抗體)Human TARS2 ELISA Kit大鼠甲羥戊5-焦磷脫羧(MDD)免疫試劑盒

細(xì)黃鏈霉菌乳糖變種生長(zhǎng)停滯特異性蛋白2家族1抗體Human TAX1BP1 ELISA Kit大鼠低密度脂蛋白(VLDL)免疫試劑盒

蠟狀芽孢桿菌G蛋白偶聯(lián)受體97抗體Human TAX1BP3 ELISA Kit大鼠激肽原(KNG)免疫試劑盒

羊泰勒蟲(chóng)（臨潭株-1）G蛋白結(jié)合蛋白7抗體Human TBC1D17 ELISA Kit大鼠激動(dòng)異構(gòu)/分裂MB(CKMB)免疫試劑盒

巴斯德畢赤酵母綠色熒光蛋白抗體Human TBC1D19 ELISA Kit大鼠基質(zhì)衍生因子1β(SDF-1β/CXCL12)免疫試劑盒

蠟樣芽孢桿菌綠色熒光蛋白抗體Human PANX1(Pannexin-1) ELISA Kit大鼠基質(zhì)衍生因子1a(SDF-1a/CXCL12)免疫試劑盒

葡萄座腔菌G蛋白通路抑制蛋白1抗體Human TACC2 ELISA Kit大鼠基質(zhì)金屬蛋白抑制因子3(TIMP-3)免疫試劑盒

Myxococcus sp.膠質(zhì)系源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子受體α2抗體Human C4B(Complement C4-B) ELISA Kit大鼠基質(zhì)金屬蛋白抑制因子2(TIMP-2)免疫試劑盒

米舒青霉核突觸蛋白-γ抗體Human TACC3 ELISA Kit大鼠基質(zhì)金屬蛋白抑制因子1(TIMP-1)免疫試劑盒

三孢布霉粒-巨噬克激因子抗體Human TADA1L ELISA Kit大鼠基質(zhì)金屬蛋白9/明膠B(MMP-9/Gelatinase B) 免疫試劑盒

亞硝鹽對(duì)照液還原抗體Human TACO1/CCDC44 ELISA Kit大鼠基質(zhì)金屬蛋白8/中性粒膠原(MMP-8/Collagenase II)免疫試劑盒

寡養(yǎng)野野村氏菌Nonomuraea│astidiosa corrig. 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品穗花杉雙黃

: K77/39資源名稱(chēng): 吉夫沙門(mén)氏菌 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品, 用于環(huán)境分析沙苑子苷A

擬莖點(diǎn)霉Phomopsis│liquidambari C.Q. Chang Z.D. Jiang & P.K. Chi 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.9%(GC)巴豆苷
Tris-EDTA抗原修復(fù)液TRACP-5b ELISA Kit  大鼠抗酒石suansuan性磷suanmei5b規(guī)格： 48T

GIP ELISA Kit  大鼠葡萄糖依賴(lài)性胰島su釋放多肽規(guī)格： 48T

GP-II ELISA Kit  大鼠糖原磷suan化mei同工meiII規(guī)格： 48T

GP-MM ELISA Kit  大鼠糖原磷suan化mei同工meiMM規(guī)格： 48T

GP-BB ELISA Kit  大鼠糖原磷suan化mei同工meiBB規(guī)格： 48T

使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來(lái)篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型，培養(yǎng)基，生長(zhǎng)條件和細(xì)胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過(guò)建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線，來(lái)確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL；細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度，可通過(guò)建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來(lái)實(shí)現(xiàn)，至少選擇5個(gè)濃度。

1）  第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過(guò)夜；注：對(duì)于需要更高密度來(lái)檢測(cè)活力的細(xì)胞，可增加接種量。

2）  根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例，可設(shè)定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。

4）  接下來(lái)每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來(lái)確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長(zhǎng)的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。

3.   穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選

1）  轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來(lái)傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過(guò)于稠密，其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過(guò)25%

2）  每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

3）  篩選7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間，這取決于宿主細(xì)胞類(lèi)型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。

4）   挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

5）   之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。