詳細(xì)介紹
抗體制備過程:
1.材料與試劑
a.提取的動(dòng)物 Ig
b.弗氏*佐劑和弗氏不*佐劑
c.青霉素和鏈霉素
d.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 兔
e.其它材料及試劑
2、選擇實(shí)驗(yàn)活體。
3、進(jìn)行動(dòng)物免疫實(shí)驗(yàn)。
4、試取血樣進(jìn)行測(cè)試,查看免疫效果。
5、如果免疫成功,殺死實(shí)驗(yàn)活體,采集全部血清。
6、純化出抗體。
7、鑒定抗體。胎牛血清(無菌采制)
公司專業(yè)供應(yīng)的抗體,抗體是用于化學(xué)反應(yīng)、分析化驗(yàn)、研究實(shí)驗(yàn)、教學(xué)實(shí)驗(yàn)、化學(xué)配方使用的純凈化學(xué)品,產(chǎn)品品質(zhì),價(jià)格實(shí)惠,多種規(guī)格供應(yīng),售后完善。
產(chǎn)品名稱 | 磷酸化蛋白激酶AKT1抗體 |
英文名稱 | phospho-AKT1 (Ser246) |
規(guī)格 | 0.1ml |
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抗體的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對(duì)該分子進(jìn)行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動(dòng)物
常用于制備抗血清的動(dòng)物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量時(shí)需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動(dòng)脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定
得到的抗血清需要進(jìn)一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進(jìn)行層析,具有高效,特異性強(qiáng),純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對(duì)分子的質(zhì)量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存
建議將抗體分裝后進(jìn)行保存??贵w一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會(huì)影響效價(jià),而真空干燥保存時(shí)間可以更久。保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
抗體的制備過程:
1. 免疫原:普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原;小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對(duì)該分子進(jìn)行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動(dòng)物:常用于制備抗血清的動(dòng)物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量時(shí)需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集:一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動(dòng)脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定:得到的抗血清需要進(jìn)一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進(jìn)行層析,具有高效,特異性強(qiáng),純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對(duì)分子的質(zhì)量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存:抗體一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會(huì)影響效價(jià),而真空干燥保存時(shí)間可以更久。保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
抗體分子標(biāo)記技術(shù):
(一)原理
當(dāng)應(yīng)用化學(xué)氧化法時(shí)(NaI)遇強(qiáng)氧化劑,離子被氧化為分子,所生成的自由分子可與某些基團(tuán)進(jìn)行鹵化反應(yīng)。蛋白質(zhì)分子可進(jìn)行鹵化反應(yīng)的基團(tuán)主要為酪氨酸殘基,某些組氨酸殘基也可能進(jìn)行化。在應(yīng)用胺T( Chloramine T)法的實(shí)驗(yàn)中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強(qiáng)揮發(fā)性的有機(jī)溶劑中。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(fā)(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質(zhì)液加入包被好的試管中,反應(yīng)完成即將混合液移入他管終止反應(yīng)。
(二)準(zhǔn)備
1.試劑
經(jīng)親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體;0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5;無載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液;100g/L三醋酸;70%乙醇;新鮮制備的含2mg/m1絡(luò)胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5);胺T反應(yīng)終止緩沖液;
2.儀器
凝膠過濾柱;¥-記數(shù)器;玻璃纖維濾。
(三)操作要點(diǎn)
1.用胺T法進(jìn)行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進(jìn)行;
2.如果氧化反應(yīng)損傷蛋白質(zhì),可將抗體與異硫氰酸熒光素(FITC)偶聯(lián))胺T量減少到0.02mg/m,并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml;
3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年;
4.1251標(biāo)記的抗體,在制備后六周內(nèi)均可使用(1251的半衰期為59.6天);
5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低;
6.酪氨酸的碘化偶爾會(huì)對(duì)抗原的抗體結(jié)合位點(diǎn)有干擾,因此降低其結(jié)合能力,但這種情況很少見。
野野村氏菌屬 muraea sp.
野尻鏈霉菌 Streptomyces jiriensis
洋紅馬杜拉放線菌 Actimadura carminata var.fujan nav. Var.
洋蔥曲霉 Aspergillus alliaceus
燕麥細(xì)鐮孢霉 Fusarium avenaceum
厭鹽假諾卡氏菌 Pseudocardia halophobica
鹽生擬諾卡氏菌 cardiopsis salina
鹽單孢菌屬菌種 Halomonas sp.
煙色擬多毛盤孢菌 Pestalotiopsis sp.
煙色鏈霉菌 Streptomyces fumosus
ISL LIM同源框蛋白1(ISL1)ELISA Kit for ISL LIM Homeobox Protein 1 (ISL1)規(guī)格:48T/96T
小異二聚體伴侶(SHP)ELISA Kit for Small Heterodimer Partner (SHP)規(guī)格:48T/96T
血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)ELISA Kit for Angiotensin I Converting Enzyme (ACE)規(guī)格:48T/96T
凋亡相關(guān)因子(FAS)ELISA Kit for Factor Related Apoptosis (FAS)規(guī)格:48T/96T
B-細(xì)胞淋巴瘤因子2(Bcl2)ELISA Kit for B-Cell Leukemia/Lymphoma 2 (Bcl2)規(guī)格:48T/96T
血紅素氧合酶2(HO2)ELISA Kit for Heme Oxygenase 2, Decycling (HO2)規(guī)格:48T/96T
地塞米松誘導(dǎo)蛋白(DEXI)ELISA Kit for Dexamethasone Induced Protein (DEXI)規(guī)格:48T/96T
Salusinβ蛋白(Salusinβ)ELISA Kit for Salusin Beta規(guī)格:48T/96T
抗酒石性磷酶(ACP5)ELISA Kit for Acid Phosphatase 5, Tartrate Resistant (ACP5)規(guī)格:48T/96T
熱休克蛋白40(HSP40)ELISA Kit for Heat Shock Protein 40 (HSP40)規(guī)格:48T/96T
多巴受體D3(DRD3)ELISA Kit for Dopamine Receptor D3 (DRD3)規(guī)格:48T/96T
胰淀素(IAPP)ELISA Kit for Islet Amyloid Polypeptide (IAPP)規(guī)格:48T/96T
磷酸化蛋白激酶AKT1抗體CCK-8(Rat cholecystokinin octapeptide) 檢測(cè)試劑盒 膽囊收縮素/縮膽囊素八肽* 規(guī)格: 48T/96T
CCK-8(Human cholecystokinin octapeptide) 檢測(cè)試劑盒 膽囊收縮素/縮膽囊素八肽* 規(guī)格: 48T/96T
CCK(Mouse Cholecystokinin) 檢測(cè)試劑盒 膽囊收縮素/腸促胰酶肽* 規(guī)格: 48T/96T
CCK(Human cholecystokinin) 檢測(cè)試劑盒 膽囊收縮素/腸促胰酶肽* 規(guī)格: 48T/96T
CCK 檢測(cè)試劑盒 膽囊收縮素/腸促胰酶肽* 規(guī)格: 48T/96T
CCB(Mouse calcium channel blockers) 檢測(cè)試劑盒 鈣通道阻滯劑* 規(guī)格: 48T/96T
CCA(Human Colon Cancer Antigen) 檢測(cè)試劑盒 結(jié)腸癌抗原* 規(guī)格: 48T/96T