詳細(xì)介紹
抗體的制備過程:
1. 免疫原:普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進行誘導(dǎo)表達(dá)獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原;小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物:常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集:一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定:得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存:抗體一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
產(chǎn)品名稱 | 鈣調(diào)節(jié)素抗體(鈣調(diào)蛋白/鈣調(diào)素) |
英文名稱 | Calmodulin |
規(guī)格 | 0.1ml |
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公司專業(yè)供應(yīng)的抗體,抗體是用于化學(xué)反應(yīng)、分析化驗、研究實驗、教學(xué)實驗、化學(xué)配方使用的純凈化學(xué)品,產(chǎn)品品質(zhì),價格實惠,多種規(guī)格供應(yīng),售后完善??贵w的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進行誘導(dǎo)表達(dá)獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定
得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存
建議將抗體分裝后進行保存??贵w一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
抗體分子標(biāo)記技術(shù):
(一)原理
當(dāng)應(yīng)用化學(xué)氧化法時(NaI)遇強氧化劑,離子被氧化為分子,所生成的自由分子可與某些基團進行鹵化反應(yīng)。蛋白質(zhì)分子可進行鹵化反應(yīng)的基團主要為酪氨酸殘基,某些組氨酸殘基也可能進行化。在應(yīng)用胺T( Chloramine T)法的實驗中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強揮發(fā)性的有機溶劑中。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(fā)(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質(zhì)液加入包被好的試管中,反應(yīng)完成即將混合液移入他管終止反應(yīng)。
(二)準(zhǔn)備
1.試劑
經(jīng)親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體;0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5;無載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液;100g/L三醋酸;70%乙醇;新鮮制備的含2mg/m1絡(luò)胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5);胺T反應(yīng)終止緩沖液;
2.儀器
凝膠過濾柱;¥-記數(shù)器;玻璃纖維濾。
(三)操作要點
1.用胺T法進行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進行;
2.如果氧化反應(yīng)損傷蛋白質(zhì),可將抗體與異硫氰酸熒光素(FITC)偶聯(lián))胺T量減少到0.02mg/m,并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml;
3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年;
4.1251標(biāo)記的抗體,在制備后六周內(nèi)均可使用(1251的半衰期為59.6天);
5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低;
6.酪氨酸的碘化偶爾會對抗原的抗體結(jié)合位點有干擾,因此降低其結(jié)合能力,但這種情況很少見。
抗體制備過程:
1.材料與試劑
a.提取的動物 Ig
b.弗氏*佐劑和弗氏不*佐劑
c.青霉素和鏈霉素
d.實驗動物 兔
e.其它材料及試劑
2、選擇實驗活體。
3、進行動物免疫實驗。
4、試取血樣進行測試,查看免疫效果。
5、如果免疫成功,殺死實驗活體,采集全部血清。
6、純化出抗體。
7、鑒定抗體。胎牛血清(無菌采制)
補體因子D(CFD)沙漠類芽胞桿菌拉丁屬名: Paenibacillus deserti
血漿纖維連接蛋白(pFN) 居泉沙雷氏菌拉丁屬名: Serratia fonticola
細(xì)胞纖維連接蛋白(cFn) 薄黑孔菌拉丁屬名: Nigroporus vinosus
總蛋白S(TPS)釀酒酵母拉丁屬名: Saccharomyces cerevisiae
血清剝奪反應(yīng)相關(guān)蛋白(SDPR)釀酒酵母拉丁屬名: Saccharomyces cerevisiae
中性粒細(xì)胞防御素1-3(HNP1-3)平菇注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用
嗜酸性粒細(xì)胞陽離子蛋白(ECP)繩狀青霉拉丁屬名: Penicillium funiculosum
血漿抗凝蛋白S(PS) 淺黃隱球酵母拉丁屬名: Cryptococcus flavescens
血漿抗凝蛋白C(PC) 居真菌細(xì)菌拉丁屬名: Mycetocola sp.
免疫球蛋白G Fc片段(Fcγ)燼灰產(chǎn)色鏈霉菌拉丁屬名: Streptomyces cinerochromogenes
嗜環(huán)蛋白/親環(huán)素B(CyPB) 叢毛單胞菌用途: 在無機鹽培養(yǎng)基中以60mg/L的甲酸為碳源培養(yǎng),3天內(nèi)降解率大于90%
凝血因子ⅩⅢ(FⅩⅢ)中國臺灣根霉拉丁屬名: Rhizopus formosensis Nakazawa
凝血因子Ⅲ(FⅢ)密歇根棍狀桿菌標(biāo)記亞種拉丁屬名: Clavibacter michiganensis subsp. tessellarius
補體1q(C1q)大腸埃希菌拉丁屬名: coli
血小板膜糖蛋白Ⅳ(GP-Ⅳ)板栗蛇孢日規(guī)殼拉丁屬名: Ophiognomonia castanea
胸腺肽α1(Thymosin α1) 間型假絲酵母拉丁屬名: Candida intermedia
鈣調(diào)節(jié)素抗體(鈣調(diào)蛋白/鈣調(diào)素)環(huán)磷酰胺(CTX)ELISA試劑盒英文名稱:Human Cyclophosphamide,CTX ELISA Kit*
黃體生成素釋放激素(LHRH)ELISA試劑盒英文名稱:Human Luteinizing Hormone-Releasing Hormone,LHRH ELISA Kit *
混合系列蛋白激酶樣結(jié)構(gòu)域(MLKL)ELISA試劑盒英文名稱:human mixed lineage kinase domain-like,MLKL ELISA Kit進口/原裝
活化蛋白C(APC) ELISA試劑盒英文名稱:Human activated protein C,APC ELISA Kit進口/分裝
活化蛋白C抵抗素(APCR)ELISA試劑盒英文名稱:Human activated protein C resistance,APCR ELISA Kit進口/原裝
活化凝血因子Ⅻ(FⅫa)ELISA試劑盒英文名稱:Human activated coagulation factor Ⅻ,FⅫa ELISA Kit進口/原裝豚鼠鉤端螺旋體IgG(Lebtospira)ELISA試劑盒 組裝/原裝
豚鼠肝細(xì)胞生長因子(HGF)ELISA試劑盒 組裝/原裝
豚鼠端粒酶(TE)ELISA試劑盒 組裝/原裝
豚鼠單核細(xì)胞趨化蛋白4(MCP-4/CCL13)ELISA試劑盒 組裝/原裝