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產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
蘇丹Ⅳ染色液-A液 | 100ml | FS-R7005 |
產(chǎn)品分類:脂類染色
儲(chǔ)存條件:室溫,避光,12個(gè)月
用途:脂肪染色,主要用于顯示組織器官的脂肪變性和類脂質(zhì)的異常沉著。
注意事項(xiàng):主要由蘇丹HONG四號(hào)、乙醇等組成。
配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理:
1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因;
EDTA是四元酸,是一種白色晶體粉末,常用H4Y表示,溶解度很小,室溫溶解度為0.02g/100g H2O。
2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑,基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理:稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層,然后用水洗凈,烘干。
配制步驟:
1、取適量鋅片放在100mL燒杯中,用0.1mol·L-1 HCl溶液(自配)清洗1min,再用自來(lái)水、純水洗凈,烘干、冷卻。
2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15~0.2g Zn,蓋好小表面皿。
3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸,待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁,小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中,用純水稀釋至標(biāo)線,搖勻。
實(shí)驗(yàn)方法與判定:
1.對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性
2.對(duì)照品溶液的配制:精密量取腦對(duì)照品適量,加無(wú)水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液,作為對(duì)照品溶液。
3.色譜條件:以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱;柱溫120℃;進(jìn)樣口溫度250℃;檢測(cè)器溫度250℃;分流進(jìn)樣,分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000。
4.實(shí)驗(yàn)方法:配制的對(duì)照品溶液,一份置冷處保存,一份置室溫中保存,在第1、3、7、10、15天重新配制一份對(duì)照品溶液,三種儲(chǔ)備液同時(shí)稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法,并依據(jù)新對(duì)照品的峰面積計(jì)算原對(duì)照品溶液的含量。記錄下來(lái),保證原對(duì)照品溶液含量在考察期相對(duì)平均偏差不超過(guò)2.0%,驗(yàn)證對(duì)照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。
粉被馬婭霉幾丁質(zhì)3樣蛋白3抗體Human EFHD1 ELISA Kit兔尿激型纖溶原激活物(uPA)免疫試劑盒
副豬嗜血桿菌趨化樣因子超家族成員2抗體Human EIF3C ELISA Kit兔內(nèi)皮型一氧化氮合成(eNOS)免疫試劑盒
貝倫格葡萄座腔菌趨化樣因子超家族成員2亞型1抗體Human EFTUD1 ELISA Kit兔末端補(bǔ)體復(fù)合物C5b-9(TCC C5b-9)免疫試劑盒
芽孢桿菌18號(hào)染色體開放閱讀框1抗體Human EFS ELISA Kit兔淋巴功能相關(guān)抗原3(LFA-3/CD58)免疫試劑盒
檸檬桿菌色c氧化VIIA亞型2抗體Human EFTUD2 ELISA Kit兔粒集落激因子(G-CSF)免疫試劑盒
黃曲霉鈣離子通道a1F亞型抗體Human EFHA1 ELISA Kit兔可溶性凋亡相關(guān)因子(sFAS/Apo-1)免疫試劑盒
黃粘蓋牛肝菌鈣調(diào)磷B亞基B1抗體Human EFHC1 ELISA Kit兔抗糖蛋白抗體(GP)免疫試劑盒
宇佐曲霉鈣調(diào)蛋白激激α抗體CaMKKαHuman EIF1 ELISA Kit兔抗平滑肌抗體(ASMA) 免疫試劑盒
彎孢菌環(huán)腺苷應(yīng)答元件結(jié)合蛋白H抗體Human EFHD1 ELISA Kit兔抗凝血III(SERPINC1)免疫試劑盒
雜色曲霉磷化周期檢測(cè)點(diǎn)激1抗體Human EFS ELISA Kit兔抗腦組織抗體(ABAb)免疫試劑盒
肺形側(cè)耳鈣激活蛋白12抗體Human Eg5 ELISA Kit兔抗內(nèi)皮抗體(AECA)免疫試劑盒
Au141(黑木耳)20號(hào)染色體開放閱讀框134抗體Human EFTUD2 ELISA Kit兔抗單核抗體(AMA)免疫試劑盒
廣食黃桿菌B粘附分子CD239抗體Human EHBP1 ELISA Kit兔膠原吡啶交聯(lián)(PYD)免疫試劑盒
聚生殼菌胰羧肽B2抗體Human EHD1 ELISA Kit兔降鈣原(PCT)免疫試劑盒
草假單胞菌視網(wǎng)膜色變性蛋白26抗體Human EFTUD1 ELISA Kit兔降鈣基因相關(guān)肽(CGRP)免疫試劑盒
松口蘑過(guò)氧化物體肉堿?;D(zhuǎn)移抗體Human EFHA1 ELISA Kit兔甲狀旁腺激(PTH)免疫試劑盒
新城疫病毒Rubulavirus│Newcastle disease virus 質(zhì)量規(guī)格:Al2O3>90%,BCS100鈣結(jié)合蛋白A9/鈣粒蛋白B試劑盒律草
凝結(jié)芽孢桿菌Bacillus│coagulans 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BRS100鈣結(jié)合蛋白A8/鈣粒蛋白A試劑盒龍膽
青霉Penicillium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:效價(jià):>900 u/mgS100鈣結(jié)合蛋白A8/A9復(fù)合物試劑盒藜蘆
蘇丹Ⅳ染色液-A液irGH(Human Immunoreactive growth hormone) ELISA Kit 人免疫反應(yīng)性生長(zhǎng)激su規(guī)格: 48T
ADH/VP/AVP(Human antidiuretic hormone/vasopressin/arginine vasopressin) ELISA Kit 人抗利尿激su/血管加壓su/精氨suan加壓su規(guī)格: 48T
GAL(Human galanin) ELISA Kit 人甘丙肽/甘丙su規(guī)格: 48T
SR(Human secretin receptor) ELISA Kit 人促胰液su/分泌su受體規(guī)格: 48T
ER(Human Estrogen Receptor) ELISA Kit 人雌激su受體規(guī)格: 48T
使用方法:
1. 常用篩選濃度
注意:用來(lái)篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型,培養(yǎng)基,生長(zhǎng)條件和細(xì)胞代謝率而變化,推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過(guò)建立殺滅曲線(kill curve),即劑量反應(yīng)性曲線,來(lái)確定最佳篩選濃度。
一般而言,哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL;細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 殺滅曲線的建立
注意:為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株,需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度,可通過(guò)建立殺滅曲線(劑量反應(yīng)曲線)來(lái)實(shí)現(xiàn),至少選擇5個(gè)濃度。
1) 第一天:未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上,37℃,CO2培養(yǎng)過(guò)夜;注:對(duì)于需要更高密度來(lái)檢測(cè)活力的細(xì)胞,可增加接種量。
2) 根據(jù)細(xì)胞類型,設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例,可設(shè)定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml,然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。
3) 第二天:替換舊的培養(yǎng)基,換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。
4) 接下來(lái)每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。
5) 按照固定的周期(如每2天)進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來(lái)確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長(zhǎng)的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)(通常是7-10天)內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。
3. 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選
1) 轉(zhuǎn)染48h后,用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來(lái)傳代細(xì)胞(直接傳代或者稀釋后傳代)。
注意:細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過(guò)于稠密,其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果,最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過(guò)25%
2) 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。
3) 篩選7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間,這取決于宿主細(xì)胞類型,轉(zhuǎn)染,以及篩選效果。
4) 挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板,繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。
5) 之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。