ATTO 565琥珀酰亞胺酯實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測的局限，實(shí)現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強(qiáng)度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計(jì)算，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。

參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：ATTO 565琥珀酰亞胺酯
貨號：FSP234
產(chǎn)品規(guī)格：1mg/5mg/100mg
分類：熒光核酸試劑
儲存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸：低溫、避光，快遞免費(fèi)送貨上門。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
產(chǎn)品僅用于科研本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。
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儲存條件：
14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
探針法：
aqMan 探針是一種寡核苷酸探針，它的熒光與目的序列的擴(kuò)增相關(guān)。它與目標(biāo)序列上游引物和下游引物之間的序列配對。熒光基團(tuán)連接在探針的5’ 末端，而淬滅劑則在3’ 末端。當(dāng)完整的探針與目標(biāo)序列配對時，熒光基團(tuán)發(fā)射的熒光因與3’ 端的淬滅劑接近而被淬滅。但在進(jìn)行延伸反應(yīng)時，聚合酶的5’ 外切酶活性將探針進(jìn)行酶切，使得熒光基團(tuán)與淬滅劑分離。隨著擴(kuò)增循環(huán)數(shù)的增加，釋放出來的熒光基團(tuán)不斷積累。因此熒光強(qiáng)度與擴(kuò)增產(chǎn)物的數(shù)量呈正比關(guān)系。相對于染料法,Taqman探針法具有更高的特異性和準(zhǔn)確性。
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl） 
1 μl      加ddH2O至 50 μl 
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
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ATTO 565琥珀酰亞胺酯Pseudomonas│plecoglossicida分離基物: 土壤斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 可以在含3000mg/l的甲磺隆的無機(jī)鹽培養(yǎng)基中生長培養(yǎng)基: 0002生長條件: 30℃存儲條件: -80℃冰箱凍結(jié)法；定期移植法

Tatumella│sp.分離基物: 大溪地諾尼果凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: CM0217生長條件: 28℃存儲條件: -80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法

Pseudomonas│sp.凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 0033生長條件: 30℃存儲條件: -80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法；定期移植法

Nocardia│sp.凍干物模式菌株: yes培養(yǎng)基: 38生長條件: 28℃存儲條件: 液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法

Exiguobacterium│profundum分離基物: 沉積物/珊瑚砂顆粒斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 1.生物降解；2.生物催化；3.生物活性物質(zhì)篩選； 4.海洋微生物生態(tài)學(xué)研究。培養(yǎng)基: 821生長條件: 25℃存儲條件: 液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法

Aspergillus│sydowii (Bainier & Sartory) Thom & Church分離基物: 樹皮表面斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 14生長條件: 28存儲條件: 定期移植法

Enterococcus│faecalis凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 6生長條件: 36℃存儲條件: 定期移植法

瓊氏不動桿菌種屬: AcinetobacterjuniiBouvetandGrimont安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 2生長條件: 37℃

Bacillus│licheniformis斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 堿性蛋白酶。培養(yǎng)基: CM0002生長條件: 30℃存儲條件: 定期移植法；其他
操作程序：
產(chǎn)品僅用于科研由您提供該實(shí)驗(yàn)中目的基因的相關(guān)資料（如：基因名稱、序列等信息），我們共同探討服務(wù)的可能性和技術(shù)路線；
商定服務(wù)收費(fèi)、付款方式、服務(wù)期限等，并簽定技術(shù)服務(wù)合同。
有您提供實(shí)驗(yàn)所需的足夠量的實(shí)驗(yàn)樣本（100mg組織或107個細(xì)胞），本公司不接受您提供的RNA樣本PCR所需引物/探針（如果用探針法），可以由您自己提供，也可以委托本公司設(shè)計(jì)合成（費(fèi)用另計(jì)）。如果由您自己提供，必須是PAGE純化的高質(zhì)量的干粉，本公司不接受已溶解的引物/探針。
我們進(jìn)行RNA抽提、RNA定量、反轉(zhuǎn)錄、Real-time PCR擴(kuò)增、數(shù)據(jù)分析。
提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告，包括實(shí)驗(yàn)過程、所用儀器試劑、擴(kuò)增曲線、標(biāo)準(zhǔn)曲線和相關(guān)分析數(shù)據(jù)等。