Tricine加樣緩沖液公司正在銷(xiāo)售的產(chǎn)品：Anti-TNFRSF6B Antibody人型肝炎IgM
Anti-TNFRSF9 Antibody大鼠游離狀腺原
Anti-TNFSF10 Antibody人型肝炎IgG
Anti-TNFSF11 Antibody大鼠新生甲狀腺素
Anti-TNFSF4 Antibody大鼠胰島素
Anti-TNFSF12 Antibody人糖蛋白130
Anti-

公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡(jiǎn)單、易保存等特點(diǎn)，咨詢(xún)并訂購(gòu)！

產(chǎn)品分類(lèi)：蛋白電泳

儲(chǔ)存條件：—20℃,12個(gè)月

用途：又稱(chēng)三羥甲基甘氨酸加樣緩沖液,Tris-tricine緩沖系統(tǒng)的PAGE電泳

注意事項(xiàng)：主要由Tris-HCl、DTT、G-250等組成。

 

 

配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理：

1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因；

EDTA是四元酸，是一種白色晶體粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室溫溶解度為0.02g/100g H2O。

2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑，基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理：稱(chēng)量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層，然后用水洗凈，烘干。

配制步驟：

1、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自來(lái)水、純水洗凈，烘干、冷卻。

2、用直接稱(chēng)量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱(chēng)取0.15～0.2g Zn，蓋好小表面皿。

3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中，用純水稀釋至標(biāo)線，搖勻。

 

 

實(shí)驗(yàn)方法與判定：

1.對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性

2.對(duì)照品溶液的配制：精密量取腦對(duì)照品適量，加無(wú)水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

3.色譜條件：以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱；柱溫120℃；進(jìn)樣口溫度250℃；檢測(cè)器溫度250℃；分流進(jìn)樣，分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000。

4.實(shí)驗(yàn)方法：配制的對(duì)照品溶液，一份置冷處保存，一份置室溫中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份對(duì)照品溶液，三種儲(chǔ)備液同時(shí)稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法，并依據(jù)新對(duì)照品的峰面積計(jì)算原對(duì)照品溶液的含量。記錄下來(lái)，保證原對(duì)照品溶液含量在考察期相對(duì)平均偏差不超過(guò)2.0%，驗(yàn)證對(duì)照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。

紅色蠟?zāi)⒁环N腫瘤抑制基因抗體（N端）Anti-CASP8(P10) AntibodyN端中段骨鈣(N-MID-OT)

香港洛克氏菌腺苷單磷活化蛋白激α1/AMPK α 1抗體Anti-CASP8 AntibodyN端外顯肽(Ext-N)

白僵菌維生K依賴(lài)的蛋白C重鏈抗體Anti-CASP8(P18) AntibodyN端前腦鈉(NT-proBNP)

長(zhǎng)蠕孢菌神經(jīng)叢蛋白A1抗體Anti-CASP8 AntibodyNOGO-A抗體(Nogo-A Ab)

p21激活激4抗體Anti-CASP9(small)(p10) AntibodyNOD樣受體(NLR)

Aquimonas磷化p21激活激4/5/6抗體Anti-CASP8(P18) AntibodyNADPH氧化3(NOX3/MOX2)

Microbacterium marinilacus磷化p21激活激1/2抗體Anti-CASP9(p35) AntibodyNADPH氧化1(NOX1/MOX1/NOH1)

變異鏈霉菌磷化p21激活激1/2抗體Anti-Caspase-1(P20)/CASP1 AntibodyNa+/H+交換體3(NHE3)

干草鞘單胞菌磷化p21激活激2抗體Anti-CASP9(large) AntibodyN(ε)羧乙基賴(lài)(CEL)

蠟狀芽孢桿菌磷酯Cγ2抗體Anti-Caspase-9 p35/Casp9 AntibodyMYC誘導(dǎo)核抗原(MINA)

枯草芽胞桿菌磷化血小板源性生長(zhǎng)因子受體-α抗體Anti-CAST AntibodyMAX二聚化蛋白1(mxd1)

產(chǎn)堿普羅威登斯菌磷化血小板源性生長(zhǎng)因子受體-α抗體Anti-CAT AntibodyMAP磷雙特異性磷1(DUSP-1)

假單胞菌P73腫瘤抑制基因抗體Anti-CAV1 AntibodyM2腎激(M2-PK)

鹽假單胞菌表觀抑制因子Polycomb家族成員PCGFl蛋白抗體Anti-CASR Antibody(PB0970)L選擇(L-Selectin/CD62L)

蘇云金芽孢桿菌擬步行甲亞種G蛋白偶聯(lián)受體p2y10抗體Anti-CAV2 AntibodyL-乳脫氫(L-LDH)

哈茨木霉腺苷環(huán)化激活肽-27/38抗體Anti-CAV2 Antibody(PB0108)L-解(PAL)

鏈霉菌屬菌種Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

O1群霍亂弧菌Vibrio│cholerae non-O1 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌Bacillus│firmus Bredemann and Werner 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR
Tricine加樣緩沖液BTK/ATK /FITC  熒光su標(biāo)記兔抗人、大、小鼠蛋白酪氨suan激meiATKIgG規(guī)格： 0.2ml

Phospho-Btk(Tyr223) /FITC  熒光su標(biāo)記兔抗人、大、小鼠蛋白酪氨suan激meiATKIgG規(guī)格： 0.2ml

Phospho-Btk(Ser180) /FITC  熒光su標(biāo)記兔抗人、大、小鼠蛋白酪氨suan激meiATKIgG規(guī)格： 0.2ml

ABCA1/FITC  熒光su標(biāo)記腺三磷suan結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1IgG規(guī)格： 0.2ml

Tap1/ABCB2 /FITC   熒光su標(biāo)記ATP結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)因子1IgG規(guī)格： 0.2ml

使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來(lái)篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型，培養(yǎng)基，生長(zhǎng)條件和細(xì)胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過(guò)建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線，來(lái)確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL；細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度，可通過(guò)建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來(lái)實(shí)現(xiàn)，至少選擇5個(gè)濃度。

1）  第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過(guò)夜；注：對(duì)于需要更高密度來(lái)檢測(cè)活力的細(xì)胞，可增加接種量。

2）  根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例，可設(shè)定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。

4）  接下來(lái)每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來(lái)確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長(zhǎng)的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。

3.   穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選

1）  轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來(lái)傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過(guò)于稠密，其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過(guò)25%

2）  每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

3）  篩選7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間，這取決于宿主細(xì)胞類(lèi)型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。

4）   挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

5）   之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。